肾脏病与透析肾移植杂志
腎髒病與透析腎移植雜誌
신장병여투석신이식잡지
CHINESE JOURNAL OF NEPHROLOGY,DIALYSIS & TRANSPLANTATION
2012年
4期
346-352
,共7页
凌光辉%唐文彬%孙林%彭佑铭%段绍斌%刘虹%李瑛%刘映红%刘伏友
凌光輝%唐文彬%孫林%彭祐銘%段紹斌%劉虹%李瑛%劉映紅%劉伏友
릉광휘%당문빈%손림%팽우명%단소빈%류홍%리영%류영홍%류복우
肾小管上皮细胞%细胞外基质%Smad锚着蛋白
腎小管上皮細胞%細胞外基質%Smad錨著蛋白
신소관상피세포%세포외기질%Smad묘착단백
目的:阐明Smad锚着蛋白(Smad anchor for receptor activation,SARA)在高葡萄糖诱导的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)细胞外基质(ECM)沉积中的作用及分子机制,探讨以SARA为靶点抑制高葡萄糖诱导的HK-2细胞ECM沉积的策略.方法:用高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激HK-2细胞,通过Western Blot及实时定量PCR( Real-time PCR)检测纤维连接蛋白(FN)和I型胶原(Col I),进而检测转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的表达变化,通过细胞免疫荧光、Western Blot、Real-time PCR检测SARA的表达变化；分别转染全长SARA质粒[SARA(WT)]及敲除SBD结构域的SARA质粒[SARA(dSRD)],检测转染后高糖诱导HK-2细胞FN及Col I表达的变化.结果:Western Blot及Real-time PCR结果显示,30mmol/L D-葡萄糖刺激后,HK-2细胞Col I蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高.高糖可诱导TGF-β1、Smad3蛋白及其mRNA表达呈时间依赖性上调；Smad2 mRNA表达呈时间依赖性上调,而其蛋白表达呈时间依赖性下调；高糖可促进Smad2和Smad3磷酸化,但Smad3的活化时间更长.而SARA的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低,细胞免疫荧光结果亦证实高糖刺激后SARA表达下降.与高糖组相比,转染SARA(WT)可使HK-2细胞FN和 Col I表达下调；转染SARA (dSBD)对高糖诱导的HK-2细胞FN和ColI表达无明显影响.结论:高糖诱导的HK-2细胞ECM沉积过程中,TGF-β1信号通路活化,SARA的表达下调；过表达SARA可能通过上调Smad2的蛋白表达,抑制TGF-β31信号传导,从而减少高糖诱导的HK-2细胞ECM分泌.
目的:闡明Smad錨著蛋白(Smad anchor for receptor activation,SARA)在高葡萄糖誘導的人近耑腎小管上皮細胞繫(HK-2細胞)細胞外基質(ECM)沉積中的作用及分子機製,探討以SARA為靶點抑製高葡萄糖誘導的HK-2細胞ECM沉積的策略.方法:用高濃度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激HK-2細胞,通過Western Blot及實時定量PCR( Real-time PCR)檢測纖維連接蛋白(FN)和I型膠原(Col I),進而檢測轉化生長因子β1( TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的錶達變化,通過細胞免疫熒光、Western Blot、Real-time PCR檢測SARA的錶達變化；分彆轉染全長SARA質粒[SARA(WT)]及敲除SBD結構域的SARA質粒[SARA(dSRD)],檢測轉染後高糖誘導HK-2細胞FN及Col I錶達的變化.結果:Western Blot及Real-time PCR結果顯示,30mmol/L D-葡萄糖刺激後,HK-2細胞Col I蛋白及mRNA錶達呈時間依賴性升高.高糖可誘導TGF-β1、Smad3蛋白及其mRNA錶達呈時間依賴性上調；Smad2 mRNA錶達呈時間依賴性上調,而其蛋白錶達呈時間依賴性下調；高糖可促進Smad2和Smad3燐痠化,但Smad3的活化時間更長.而SARA的蛋白及mRNA錶達呈時間依賴性降低,細胞免疫熒光結果亦證實高糖刺激後SARA錶達下降.與高糖組相比,轉染SARA(WT)可使HK-2細胞FN和 Col I錶達下調；轉染SARA (dSBD)對高糖誘導的HK-2細胞FN和ColI錶達無明顯影響.結論:高糖誘導的HK-2細胞ECM沉積過程中,TGF-β1信號通路活化,SARA的錶達下調；過錶達SARA可能通過上調Smad2的蛋白錶達,抑製TGF-β31信號傳導,從而減少高糖誘導的HK-2細胞ECM分泌.
목적:천명Smad묘착단백(Smad anchor for receptor activation,SARA)재고포도당유도적인근단신소관상피세포계(HK-2세포)세포외기질(ECM)침적중적작용급분자궤제,탐토이SARA위파점억제고포도당유도적HK-2세포ECM침적적책략.방법:용고농도포도당(30 mmol/L D-포도당)자격HK-2세포,통과Western Blot급실시정량PCR( Real-time PCR)검측섬유련접단백(FN)화I형효원(Col I),진이검측전화생장인자β1( TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3적표체변화,통과세포면역형광、Western Blot、Real-time PCR검측SARA적표체변화；분별전염전장SARA질립[SARA(WT)]급고제SBD결구역적SARA질립[SARA(dSRD)],검측전염후고당유도HK-2세포FN급Col I표체적변화.결과:Western Blot급Real-time PCR결과현시,30mmol/L D-포도당자격후,HK-2세포Col I단백급mRNA표체정시간의뢰성승고.고당가유도TGF-β1、Smad3단백급기mRNA표체정시간의뢰성상조；Smad2 mRNA표체정시간의뢰성상조,이기단백표체정시간의뢰성하조；고당가촉진Smad2화Smad3린산화,단Smad3적활화시간경장.이SARA적단백급mRNA표체정시간의뢰성강저,세포면역형광결과역증실고당자격후SARA표체하강.여고당조상비,전염SARA(WT)가사HK-2세포FN화 Col I표체하조；전염SARA (dSBD)대고당유도적HK-2세포FN화ColI표체무명현영향.결론:고당유도적HK-2세포ECM침적과정중,TGF-β1신호통로활화,SARA적표체하조；과표체SARA가능통과상조Smad2적단백표체,억제TGF-β31신호전도,종이감소고당유도적HK-2세포ECM분비.
