CAJ | 학술논문

目的: 摸索一种适合于中试生产的点突变重组人β干扰素(17Ser-IFN-β)发酵与纯化工艺。方法: 研究不同培养基和热诱导时间对17Ser-IFN-β表达的影响;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser-IFN-β纯化的影响。结果： 17Ser-IFN-β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中，17Ser-IFN-β表达量明显增加。灰度扫描显示热诱导4 h后的表达量最高，目的蛋白可达菌体总蛋白的20%以上。17Ser-IFN-β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中，纯度达80%，经S200凝胶过滤柱层析后纯度达90%，用G25柱转换缓冲液，使缓冲液pH值＞8，同时去除缓冲液中的还原剂DTT，将复性后的样品用C4反相柱层析进行精制，最终获得纯度＞98%和比活性>3×107 U/mg的17Ser-IFN-β制品。结论：成功地建立了注射用新型重组人β-干扰素的中试生产工艺，为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。
목적: 모색일충괄합우중시생산적점돌변중조인β간우소(17Ser-IFN-β)발효여순화공예。방법: 연구불동배양기화열유도시간대17Ser-IFN-β표체적영향;관찰pH、단백농도화층석조건대17Ser-IFN-β순화적영향。결과： 17Ser-IFN-β공정균재함감유、락단백수해물급미량원소적M9배양기중，17Ser-IFN-β표체량명현증가。회도소묘현시열유도4 h후적표체량최고，목적단백가체균체총단백적20%이상。17Ser-IFN-β가이상대특이성지피중정순추제지유궤상중，순도체80%，경S200응효과려주층석후순도체90%，용G25주전환완충액，사완충액pH치＞8，동시거제완충액중적환원제DTT，장복성후적양품용C4반상주층석진행정제，최종획득순도＞98%화비활성>3×107 U/mg적17Ser-IFN-β제품。결론： 성공지건립료주사용신형중조인β-간우소적중시생산공예，위수후진행적림상전연구급림상시험타하기출。