中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
6期
572-575
,共4页
李文姝%钟晓芝%陈俊%张丽芳%闵太善%黄伟达
李文姝%鐘曉芝%陳俊%張麗芳%閔太善%黃偉達
리문주%종효지%진준%장려방%민태선%황위체
弓形虫%重组蛋白ROP2-P30%免疫活性
弓形蟲%重組蛋白ROP2-P30%免疫活性
궁형충%중조단백ROP2-P30%면역활성
目的 分析基因工程生产的弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)的体外免疫反应性,并对表达产物进行复性处理以获得表达产物的天然构象,为体内免疫学活性的研究作准备.方法 重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL菌株,经IPTG诱导的表达产物超声破壁后,SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,对产生的重组蛋白ROP2-P30过SephdexG-25交联葡聚糖柱,经尿素梯度洗脱进行目的蛋白的复性,通过免疫共沉淀反应及免疫印迹实验检测其复性后的重组蛋白的免疫反应性.结果 重组质粒pET28b/ROP2-P30在大肠杆菌中以融合形式表达,融合表达的产物主要以包涵体形式存在,该重组蛋白复性后具有明显的免疫反应性.结论 利用Sephadex G-25交联葡聚糖柱尿素梯度可以复性重组的弓形虫复合蛋白ROP2-P30,该蛋白复性后体外具有免疫反应性,可用于进一步开展弓形虫病复合型疫苗的研制工作.
目的 分析基因工程生產的弓形蟲棒狀體蛋白2(ROP2)和膜錶麵蛋白1(P30)的體外免疫反應性,併對錶達產物進行複性處理以穫得錶達產物的天然構象,為體內免疫學活性的研究作準備.方法 重組質粒pET28b/ROP2-P30轉化大腸桿菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL菌株,經IPTG誘導的錶達產物超聲破壁後,SDS-PAGE分析錶達產物的錶達形式,對產生的重組蛋白ROP2-P30過SephdexG-25交聯葡聚糖柱,經尿素梯度洗脫進行目的蛋白的複性,通過免疫共沉澱反應及免疫印跡實驗檢測其複性後的重組蛋白的免疫反應性.結果 重組質粒pET28b/ROP2-P30在大腸桿菌中以融閤形式錶達,融閤錶達的產物主要以包涵體形式存在,該重組蛋白複性後具有明顯的免疫反應性.結論 利用Sephadex G-25交聯葡聚糖柱尿素梯度可以複性重組的弓形蟲複閤蛋白ROP2-P30,該蛋白複性後體外具有免疫反應性,可用于進一步開展弓形蟲病複閤型疫苗的研製工作.
목적 분석기인공정생산적궁형충봉상체단백2(ROP2)화막표면단백1(P30)적체외면역반응성,병대표체산물진행복성처리이획득표체산물적천연구상,위체내면역학활성적연구작준비.방법 중조질립pET28b/ROP2-P30전화대장간균BL21-Codon Plus(DE3)-RIL균주,경IPTG유도적표체산물초성파벽후,SDS-PAGE분석표체산물적표체형식,대산생적중조단백ROP2-P30과SephdexG-25교련포취당주,경뇨소제도세탈진행목적단백적복성,통과면역공침정반응급면역인적실험검측기복성후적중조단백적면역반응성.결과 중조질립pET28b/ROP2-P30재대장간균중이융합형식표체,융합표체적산물주요이포함체형식존재,해중조단백복성후구유명현적면역반응성.결론 이용Sephadex G-25교련포취당주뇨소제도가이복성중조적궁형충복합단백ROP2-P30,해단백복성후체외구유면역반응성,가용우진일보개전궁형충병복합형역묘적연제공작.
