畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
6期
752-756
,共5页
段廷云%陈红英%崔保安%魏战勇%李新生%王学斌
段廷雲%陳紅英%崔保安%魏戰勇%李新生%王學斌
단정운%진홍영%최보안%위전용%리신생%왕학빈
猪流感病毒%H1N1亚型%荧光定量PCR
豬流感病毒%H1N1亞型%熒光定量PCR
저류감병독%H1N1아형%형광정량PCR
根据GenBank中H1N1亚型猪流感病毒NP基因的序列(DQ889686),利用Premier express设计并合成1对引物和相应的TaqMan探针,从猪流感病毒HN407株接种的鸡胚尿囊液中提取总RNA,经RT-PCR扩增NP基因.将鉴定正确的NP基因片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒.以该阳性重组质粒为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.经临床应用表明荧光定量PCR的建立为早期诊断猪流感病毒、定量分析猪流感病毒感染程度奠定了基础.
根據GenBank中H1N1亞型豬流感病毒NP基因的序列(DQ889686),利用Premier express設計併閤成1對引物和相應的TaqMan探針,從豬流感病毒HN407株接種的鷄胚尿囊液中提取總RNA,經RT-PCR擴增NP基因.將鑒定正確的NP基因片段剋隆入pGEM-T Easy載體中,轉化大腸桿菌JM109,經PCR及測序鑒定後得到暘性重組質粒.以該暘性重組質粒為熒光定量PCR標準品模闆建立標準麯線.對探針濃度、引物濃度、鎂離子濃度和退火溫度進行優化,建立瞭最佳的熒光定量PCR反應體繫和擴增程序.經臨床應用錶明熒光定量PCR的建立為早期診斷豬流感病毒、定量分析豬流感病毒感染程度奠定瞭基礎.
근거GenBank중H1N1아형저류감병독NP기인적서렬(DQ889686),이용Premier express설계병합성1대인물화상응적TaqMan탐침,종저류감병독HN407주접충적계배뇨낭액중제취총RNA,경RT-PCR확증NP기인.장감정정학적NP기인편단극륭입pGEM-T Easy재체중,전화대장간균JM109,경PCR급측서감정후득도양성중조질립.이해양성중조질립위형광정량PCR표준품모판건립표준곡선.대탐침농도、인물농도、미리자농도화퇴화온도진행우화,건립료최가적형광정량PCR반응체계화확증정서.경림상응용표명형광정량PCR적건립위조기진단저류감병독、정량분석저류감병독감염정도전정료기출.
