中华老年心脑血管病杂志
中華老年心腦血管病雜誌
중화노년심뇌혈관병잡지
CHINESE JOURNAL OF GERIATRIC CARDIOVASCULAR AND CEREBROVASCULAR DISEASES
2010年
4期
348-350
,共3页
杨简%江洪%陈思思%陈静%徐盛开%王继春
楊簡%江洪%陳思思%陳靜%徐盛開%王繼春
양간%강홍%진사사%진정%서성개%왕계춘
CREB结合蛋白质%RNA干扰%转染%基因疗法
CREB結閤蛋白質%RNA榦擾%轉染%基因療法
CREB결합단백질%RNA간우%전염%기인요법
目的 构建大鼠CREB结合蛋白(CREB binding protein,CBP)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并观察该载体对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)CBP表达的沉默效应.方法 设计合成4条CBP基因的siRNA序列,将筛选确定的CBP RNAi有效靶序列与pFU-GW-iRNA载体连接产生CBP shRNA慢病毒表达载体,转化、PCR筛选阳性克隆及测序鉴定.脂质体2000将CBP shRNA慢病毒载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞,完成慢病毒颗粒包装及滴度测定.包装产生的重组慢病毒感染大鼠VSMCs,实时定量RT-PCR检测CBPmRNA的表达,并与未转染及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞进行比较.结果 PCR扩增和测序结果 证实,成功构建大鼠CBP shRNA慢病毒载体.经包装产生的慢病毒滴度为2×109TU/ml,与未转染慢病毒及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞比较,CBP shRNA慢病毒转染可使VSMCs的CBP mRNA分别下降88.5%和92.7%.结论 成功构建CBP基因RNAi慢病毒表达载体,对VSMCs的CBP表达具有良好沉默作用,为后期基因治疗血管增殖性疾病奠定基础.
目的 構建大鼠CREB結閤蛋白(CREB binding protein,CBP)基因RNA榦擾(RNAi)慢病毒載體,併觀察該載體對大鼠血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)CBP錶達的沉默效應.方法 設計閤成4條CBP基因的siRNA序列,將篩選確定的CBP RNAi有效靶序列與pFU-GW-iRNA載體連接產生CBP shRNA慢病毒錶達載體,轉化、PCR篩選暘性剋隆及測序鑒定.脂質體2000將CBP shRNA慢病毒載體和慢病毒包裝質粒共轉染293T細胞,完成慢病毒顆粒包裝及滴度測定.包裝產生的重組慢病毒感染大鼠VSMCs,實時定量RT-PCR檢測CBPmRNA的錶達,併與未轉染及轉染陰性對照shRNA慢病毒的細胞進行比較.結果 PCR擴增和測序結果 證實,成功構建大鼠CBP shRNA慢病毒載體.經包裝產生的慢病毒滴度為2×109TU/ml,與未轉染慢病毒及轉染陰性對照shRNA慢病毒的細胞比較,CBP shRNA慢病毒轉染可使VSMCs的CBP mRNA分彆下降88.5%和92.7%.結論 成功構建CBP基因RNAi慢病毒錶達載體,對VSMCs的CBP錶達具有良好沉默作用,為後期基因治療血管增殖性疾病奠定基礎.
목적 구건대서CREB결합단백(CREB binding protein,CBP)기인RNA간우(RNAi)만병독재체,병관찰해재체대대서혈관평활기세포(vascular smooth muscle cells,VSMCs)CBP표체적침묵효응.방법 설계합성4조CBP기인적siRNA서렬,장사선학정적CBP RNAi유효파서렬여pFU-GW-iRNA재체련접산생CBP shRNA만병독표체재체,전화、PCR사선양성극륭급측서감정.지질체2000장CBP shRNA만병독재체화만병독포장질립공전염293T세포,완성만병독과립포장급적도측정.포장산생적중조만병독감염대서VSMCs,실시정량RT-PCR검측CBPmRNA적표체,병여미전염급전염음성대조shRNA만병독적세포진행비교.결과 PCR확증화측서결과 증실,성공구건대서CBP shRNA만병독재체.경포장산생적만병독적도위2×109TU/ml,여미전염만병독급전염음성대조shRNA만병독적세포비교,CBP shRNA만병독전염가사VSMCs적CBP mRNA분별하강88.5%화92.7%.결론 성공구건CBP기인RNAi만병독표체재체,대VSMCs적CBP표체구유량호침묵작용,위후기기인치료혈관증식성질병전정기출.
