CAJ | 학술논문

采用PCR、RT-PCR及其他分子生物学方法,以甘蓝基因组DNA、花蕾RNA和叶片RNA为模板,分别对甘蓝KAPP gDNA和KAPP cDNA进行扩增,分别获得3 247 bp的KAPP gDNA片段、1 699 bp的KAPP cDNA片段、1 578 bp的花蕾KAPP2 cDNA片段和1 581 bp的叶片KAPP2 cDNA片段.对克隆的甘蓝KAPP gDNA和cDNA(结合报道的KAPP cDNA)进行比对表明,甘蓝KAPP基因包含11个内含子,均符合"GU-AG"剪接规则,并且克隆得到的KAPP cDNA序列与报道的KAPP cDNA序列有6处单个碱基的差异,但两者的氨基酸序列完全一致.然而花蕾KAPP2 cDNA、叶片KAPP2 cDNA片段与报道的KAPP cDNA序列相似性分别为85.2%和85.0%.这两个序列分别在590 bp和593 bp处较早出现一个无义突变引起的终止密码子.Blast分析表明,两基因编码的氨基酸序列与拟南芥KAPP氨基酸序列相似性最高,其次为甘蓝KAPP氨基酸序列.以已报道的8种植物KAPP的CDS及本实验所克隆的两个KAPP2序列构建分子进化树,获得序列与甘蓝KAPP序列聚为一支.结合比较作图及分子进化树,推测KdPP基因在甘蓝基因组上有两个拷贝,而笔者克隆到的KAPP2 cDNA序列是其中一个拷贝,是KAPP进化过程中突变失活的拟基因.
채용PCR、RT-PCR급기타분자생물학방법,이감람기인조DNA、화뢰RNA화협편RNA위모판,분별대감람KAPP gDNA화KAPP cDNA진행확증,분별획득3 247 bp적KAPP gDNA편단、1 699 bp적KAPP cDNA편단、1 578 bp적화뢰KAPP2 cDNA편단화1 581 bp적협편KAPP2 cDNA편단.대극륭적감람KAPP gDNA화cDNA(결합보도적KAPP cDNA)진행비대표명,감람KAPP기인포함11개내함자,균부합"GU-AG"전접규칙,병차극륭득도적KAPP cDNA서렬여보도적KAPP cDNA서렬유6처단개감기적차이,단량자적안기산서렬완전일치.연이화뢰KAPP2 cDNA、협편KAPP2 cDNA편단여보도적KAPP cDNA서렬상사성분별위85.2%화85.0%.저량개서렬분별재590 bp화593 bp처교조출현일개무의돌변인기적종지밀마자.Blast분석표명,량기인편마적안기산서렬여의남개KAPP안기산서렬상사성최고,기차위감람KAPP안기산서렬.이이보도적8충식물KAPP적CDS급본실험소극륭적량개KAPP2서렬구건분자진화수,획득서렬여감람KAPP서렬취위일지.결합비교작도급분자진화수,추측KdPP기인재감람기인조상유량개고패,이필자극륭도적KAPP2 cDNA서렬시기중일개고패,시KAPP진화과정중돌변실활적의기인.