广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
6期
744-746
,共3页
孙慧琳%湛奕%刘珍珍%李筠%蔡德鸿
孫慧琳%湛奕%劉珍珍%李筠%蔡德鴻
손혜림%담혁%류진진%리균%채덕홍
人脐静脉内皮细胞%细胞原代培养%Ⅷ因子相关抗原
人臍靜脈內皮細胞%細胞原代培養%Ⅷ因子相關抗原
인제정맥내피세포%세포원대배양%Ⅷ인자상관항원
目的 建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外培养模型,并对其进行鉴定,为体外血管内皮细胞及相关疾病的研究搭建桥梁.方法 采用0.1%Ⅰ型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于M199培养基(含20%胎牛血清,80%M199不完全培养基,1%终浓度为50 μg/mL内皮细胞生长复合物,1%终浓度为100 μg/mL肝素钠,1%青-链霉素,1%L-谷氨酰胺)中培养,待细胞80%以上融合后,用0.25%的胰酶和0.25%的EDTA消化传代,并在倒置显微镜下观察细胞形态,用免疫荧光法对细胞进行鉴定.结果 原代培养的HUVECs在24 h后完全贴壁,2～3 d可达80%的融合,倒置显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排布,免疫荧光显示细胞胞浆中Ⅷ因子相关抗原阳性.结论 0.1%Ⅰ型胶原酶消化HUVECs方法 便于操作,细胞获得量多且生长状态良好.
目的 建立一種能大量分離人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)體外培養模型,併對其進行鑒定,為體外血管內皮細胞及相關疾病的研究搭建橋樑.方法 採用0.1%Ⅰ型膠原酶分離臍靜脈內皮細胞,于M199培養基(含20%胎牛血清,80%M199不完全培養基,1%終濃度為50 μg/mL內皮細胞生長複閤物,1%終濃度為100 μg/mL肝素鈉,1%青-鏈黴素,1%L-穀氨酰胺)中培養,待細胞80%以上融閤後,用0.25%的胰酶和0.25%的EDTA消化傳代,併在倒置顯微鏡下觀察細胞形態,用免疫熒光法對細胞進行鑒定.結果 原代培養的HUVECs在24 h後完全貼壁,2～3 d可達80%的融閤,倒置顯微鏡下觀察細胞呈鵝卵石狀排佈,免疫熒光顯示細胞胞漿中Ⅷ因子相關抗原暘性.結論 0.1%Ⅰ型膠原酶消化HUVECs方法 便于操作,細胞穫得量多且生長狀態良好.
목적 건립일충능대량분리인제정맥내피세포(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)체외배양모형,병대기진행감정,위체외혈관내피세포급상관질병적연구탑건교량.방법 채용0.1%Ⅰ형효원매분리제정맥내피세포,우M199배양기(함20%태우혈청,80%M199불완전배양기,1%종농도위50 μg/mL내피세포생장복합물,1%종농도위100 μg/mL간소납,1%청-련매소,1%L-곡안선알)중배양,대세포80%이상융합후,용0.25%적이매화0.25%적EDTA소화전대,병재도치현미경하관찰세포형태,용면역형광법대세포진행감정.결과 원대배양적HUVECs재24 h후완전첩벽,2～3 d가체80%적융합,도치현미경하관찰세포정아란석상배포,면역형광현시세포포장중Ⅷ인자상관항원양성.결론 0.1%Ⅰ형효원매소화HUVECs방법 편우조작,세포획득량다차생장상태량호.
