CAJ | 학술논문

目的构建能够表达AFP和CTLA4融合蛋白的DNA疫苗并检测其诱导特异性CTL反应及抗产生AFP肿瘤的能力.方法利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中克隆mAFP基因.连接mAFP基因和编码小鼠CTLA4膜外部分的基因构建质粒DNA疫苗.对此疫苗进行酶切、测序和表达鉴定.用pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞系.以此DNA疫苗免疫小鼠,用ELISPOT检测免疫后小鼠脾脏细胞中产生IFN-γ的细胞频数.以EL-4(mAFP)肿瘤细胞攻击免疫后小鼠,观察肿瘤的生长情况.另外,对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测.结果利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中成功克隆出1.8kb的mAFP基因.酶切、测序和表达鉴定证实编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗构建成功.RT-PCR证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA的表达.ELISPOT检测结果显示:pmAFP-CTLA4免疫组产生IFN-γ的细胞频数显著高于pmAFP组、pcDNA3.1组和PBS组.pmAFP-CTLA4免疫组小鼠的肿瘤体积为(385.93±52.9)mm3,明显小于pmAFP组(1042.42±123.71)mm3、pcD-NA3.1组(2292.38±276.94)mm3和PBS组(2303.5±233.13)mm3,P均＜0.01.各组肝、肾功能差异无统计学意义.结论编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗能诱导产生AFP特异性的CTL增殖并诱导小鼠产生明显的抗肿瘤免疫力,此疫苗对小鼠肝、肾功能不产生影响.
목적구건능구표체AFP화CTLA4융합단백적DNA역묘병검측기유도특이성CTL반응급항산생AFP종류적능력.방법이용RT-PCR종Hepa1-6세포총RNA중극륭mAFP기인.련접mAFP기인화편마소서CTLA4막외부분적기인구건질립DNA역묘.대차역묘진행매절、측서화표체감정.용pmAFP은정전염EL-4세포건립EL-4(mAFP)세포계.이차DNA역묘면역소서,용ELISPOT검측면역후소서비장세포중산생IFN-γ적세포빈수.이EL-4(mAFP)종류세포공격면역후소서,관찰종류적생장정황.령외,대면역적소서채혈진행간、신공능검측.결과이용RT-PCR종Hepa1-6세포총RNA중성공극륭출1.8kb적mAFP기인.매절、측서화표체감정증실편마mAFP-CTLA4융합단백적DNA역묘구건성공.RT-PCR증실EL-4(mAFP)세포중유mAFP mRNA적표체.ELISPOT검측결과현시:pmAFP-CTLA4면역조산생IFN-γ적세포빈수현저고우pmAFP조、pcDNA3.1조화PBS조.pmAFP-CTLA4면역조소서적종류체적위(385.93±52.9)mm3,명현소우pmAFP조(1042.42±123.71)mm3、pcD-NA3.1조(2292.38±276.94)mm3화PBS조(2303.5±233.13)mm3,P균＜0.01.각조간、신공능차이무통계학의의.결론편마mAFP-CTLA4융합단백적DNA역묘능유도산생AFP특이성적CTL증식병유도소서산생명현적항종류면역력,차역묘대소서간、신공능불산생영향.