中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
7期
27-32
,共6页
张宇雯%刘兴汉%林慧敏%李冀红%马洪星%刘远莉
張宇雯%劉興漢%林慧敏%李冀紅%馬洪星%劉遠莉
장우문%류흥한%림혜민%리기홍%마홍성%류원리
PUMA-BH3短肽%重组表达%线粒体%促凋亡活性
PUMA-BH3短肽%重組錶達%線粒體%促凋亡活性
PUMA-BH3단태%중조표체%선립체%촉조망활성
Bcl-2家族蛋白质在线粒体途径凋亡的调控机制中起着重要的作用,p53正向细胞凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)是该家族的一种只含有BH3同源区域的促凋亡蛋白.为得到PUMA的BH3结构域短肽并检测其生物学活性,将人工合成的编码PUMA-BH3肽的DNA片段克隆到质粒pTYB2上,构建出表达PUMA-BH3-内含肽-几丁质结合域融合蛋白的原核表达载体pTYB2-PUMA-BH3,转化大肠杆菌BL-21(DE3)中IPTG诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性PUMA-BH3肽.通过研究重组PUMA-BH3肽在体外条件下对线粒体活力、线粒体肿胀度以及细胞色素c释放的影响来鉴定其生物学活性.结果表明,获得的可溶性PUMA-BH3肽能作用于离体线粒体,引起线粒体活力降低,线粒体肿胀并能诱导细胞色素c释放.环孢菌素A对此有一定的抑制作用,提示PUMA-BH3肽对线粒体的上述作用是通过促进通透性转运孔( PTP)开放实现的.经原核表达及纯化,获得了具有促凋亡活性的PUMA-BH3肽,为进一步研制控制凋亡过程的药物奠定了基础.
Bcl-2傢族蛋白質在線粒體途徑凋亡的調控機製中起著重要的作用,p53正嚮細胞凋亡調控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)是該傢族的一種隻含有BH3同源區域的促凋亡蛋白.為得到PUMA的BH3結構域短肽併檢測其生物學活性,將人工閤成的編碼PUMA-BH3肽的DNA片段剋隆到質粒pTYB2上,構建齣錶達PUMA-BH3-內含肽-幾丁質結閤域融閤蛋白的原覈錶達載體pTYB2-PUMA-BH3,轉化大腸桿菌BL-21(DE3)中IPTG誘導錶達.錶達的融閤蛋白經幾丁質親和層析、二硫囌糖醇(DTT)的柱內還原,直接穫得可溶性PUMA-BH3肽.通過研究重組PUMA-BH3肽在體外條件下對線粒體活力、線粒體腫脹度以及細胞色素c釋放的影響來鑒定其生物學活性.結果錶明,穫得的可溶性PUMA-BH3肽能作用于離體線粒體,引起線粒體活力降低,線粒體腫脹併能誘導細胞色素c釋放.環孢菌素A對此有一定的抑製作用,提示PUMA-BH3肽對線粒體的上述作用是通過促進通透性轉運孔( PTP)開放實現的.經原覈錶達及純化,穫得瞭具有促凋亡活性的PUMA-BH3肽,為進一步研製控製凋亡過程的藥物奠定瞭基礎.
Bcl-2가족단백질재선립체도경조망적조공궤제중기착중요적작용,p53정향세포조망조공인자(p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)시해가족적일충지함유BH3동원구역적촉조망단백.위득도PUMA적BH3결구역단태병검측기생물학활성,장인공합성적편마PUMA-BH3태적DNA편단극륭도질립pTYB2상,구건출표체PUMA-BH3-내함태-궤정질결합역융합단백적원핵표체재체pTYB2-PUMA-BH3,전화대장간균BL-21(DE3)중IPTG유도표체.표체적융합단백경궤정질친화층석、이류소당순(DTT)적주내환원,직접획득가용성PUMA-BH3태.통과연구중조PUMA-BH3태재체외조건하대선립체활력、선립체종창도이급세포색소c석방적영향래감정기생물학활성.결과표명,획득적가용성PUMA-BH3태능작용우리체선립체,인기선립체활력강저,선립체종창병능유도세포색소c석방.배포균소A대차유일정적억제작용,제시PUMA-BH3태대선립체적상술작용시통과촉진통투성전운공( PTP)개방실현적.경원핵표체급순화,획득료구유촉조망활성적PUMA-BH3태,위진일보연제공제조망과정적약물전정료기출.
