CAJ | 학술논문

背景:心肌成纤维细胞过度增殖、胶原合成增多是心肌纤维化的主要病理基础.慢病毒载体系统是一种新型的基因治疗转移系统,能够高效感染分裂期和非分裂期细胞.目的:建立慢病毒载体有效转移并表达于大鼠心肌成纤维细胞的方法,为利用慢病毒载体介导心肌成纤维细胞的基因靶向治疗奠定基础.设计、时间及地点:对比观察,实验予2008-08/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院老年病及上海吉凯公司实验室完成.材料:新生1～3日的SD大鼠乳鼠30只;Lentivirus载体、Enhanced Infection Solution(ENi.S)、Polybrene均为上海占凯基因化学技术有限公司产品.方法:采用差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞,在DMEM加入3个梯度Lentivirus感染细胞,将病毒复感染指数为200,20,2的3组细胞,每组分别加入①Lentivirus.②在细胞感染时添加polybrene提高感染效率.⑨在上述基础上加入具有促进病毒感染的细胞增强液(Enhanced Infection Solution(ENi.S)),感染4 d.主要观察指标:①心肌成纤维细胞形态特征.②倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况及感染效率.结果:成功建立心肌成纤维细胞培养模型,当慢病毒对心肌成纤维细胞的复感染指数为20时,可以达到80%的感染效率,然而必须在培养基内加入多聚阳离子转染试剂Polybrene,以提高慢病毒载体的感染效率.结论:慢病毒载体较易感染心肌成纤维细胞,是具有发展潜力的心肌成纤维细胞基因靶向治疗的新载体.
배경:심기성섬유세포과도증식、효원합성증다시심기섬유화적주요병리기출.만병독재체계통시일충신형적기인치료전이계통,능구고효감염분렬기화비분렬기세포.목적:건립만병독재체유효전이병표체우대서심기성섬유세포적방법,위이용만병독재체개도심기성섬유세포적기인파향치료전정기출.설계、시간급지점:대비관찰,실험여2008-08/10재화중과기대학동제의학원부속협화의원노년병급상해길개공사실험실완성.재료:신생1～3일적SD대서유서30지;Lentivirus재체、Enhanced Infection Solution(ENi.S)、Polybrene균위상해점개기인화학기술유한공사산품.방법:채용차속첩벽법배양유서심기성섬유세포,재DMEM가입3개제도Lentivirus감염세포,장병독복감염지수위200,20,2적3조세포,매조분별가입①Lentivirus.②재세포감염시첨가polybrene제고감염효솔.⑨재상술기출상가입구유촉진병독감염적세포증강액(Enhanced Infection Solution(ENi.S)),감염4 d.주요관찰지표:①심기성섬유세포형태특정.②도치현미경관찰록색형광단백표체정황급감염효솔.결과:성공건립심기성섬유세포배양모형,당만병독대심기성섬유세포적복감염지수위20시,가이체도80%적감염효솔,연이필수재배양기내가입다취양리자전염시제Polybrene,이제고만병독재체적감염효솔.결론:만병독재체교역감염심기성섬유세포,시구유발전잠력적심기성섬유세포기인파향치료적신재체.