中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
10期
39-44
,共6页
曹俊新%宋学雄%孙旺吾%唐元凤
曹俊新%宋學雄%孫旺吾%唐元鳳
조준신%송학웅%손왕오%당원봉
小鼠%胚胎成纤维细胞%分离培养
小鼠%胚胎成纖維細胞%分離培養
소서%배태성섬유세포%분리배양
本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台.本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观察了不同胎龄、不同血清浓度及不同胰蛋白酶作用时间等因素对MEF分离培养的影响.结果显示,在所进行的4个胎龄8.5、10.5、12.5、14.5d的比较试验中,原代成纤维细胞分离培养的最适胎龄为12.5d,细胞贴壁迅速,12h已完全贴壁,增殖速度快;在所进行的不同时间5、10、15、30 min的胰蛋白酶消化中,最佳时间为5～10 min;在所进行的5个血清浓度7％、9％、10％、11％、13％的比较试验中,添加11％胎牛血清浓度培养效果最佳,从3～5代增殖倍数稳定在1.35左右,传代时间也相对较长.以上结果表明,采用12.5d胎鼠,胰蛋白酶消化5～10 min,在含有11％血清的DMEM培养液中培养MEF细胞时,原代和传代效果最好,传代至第3～5代时细胞生长增殖最旺盛,处于对数分裂期,适宜作为饲养层细胞与体细胞核移植细胞核供体.
本研究旨在探索影響小鼠胚胎成纖維細胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分離培養的因素,建立有效的胚胎成纖維細胞培養體繫,為構建飼養層細胞與體細胞覈移植技術的細胞覈供體建立平檯.本研究用組織細胞培養液DMEM作為基礎培養液,觀察瞭不同胎齡、不同血清濃度及不同胰蛋白酶作用時間等因素對MEF分離培養的影響.結果顯示,在所進行的4箇胎齡8.5、10.5、12.5、14.5d的比較試驗中,原代成纖維細胞分離培養的最適胎齡為12.5d,細胞貼壁迅速,12h已完全貼壁,增殖速度快;在所進行的不同時間5、10、15、30 min的胰蛋白酶消化中,最佳時間為5～10 min;在所進行的5箇血清濃度7％、9％、10％、11％、13％的比較試驗中,添加11％胎牛血清濃度培養效果最佳,從3～5代增殖倍數穩定在1.35左右,傳代時間也相對較長.以上結果錶明,採用12.5d胎鼠,胰蛋白酶消化5～10 min,在含有11％血清的DMEM培養液中培養MEF細胞時,原代和傳代效果最好,傳代至第3～5代時細胞生長增殖最旺盛,處于對數分裂期,適宜作為飼養層細胞與體細胞覈移植細胞覈供體.
본연구지재탐색영향소서배태성섬유세포(mouse embryonic fibroblast,MEF)분리배양적인소,건립유효적배태성섬유세포배양체계,위구건사양층세포여체세포핵이식기술적세포핵공체건립평태.본연구용조직세포배양액DMEM작위기출배양액,관찰료불동태령、불동혈청농도급불동이단백매작용시간등인소대MEF분리배양적영향.결과현시,재소진행적4개태령8.5、10.5、12.5、14.5d적비교시험중,원대성섬유세포분리배양적최괄태령위12.5d,세포첩벽신속,12h이완전첩벽,증식속도쾌;재소진행적불동시간5、10、15、30 min적이단백매소화중,최가시간위5～10 min;재소진행적5개혈청농도7％、9％、10％、11％、13％적비교시험중,첨가11％태우혈청농도배양효과최가,종3～5대증식배수은정재1.35좌우,전대시간야상대교장.이상결과표명,채용12.5d태서,이단백매소화5～10 min,재함유11％혈청적DMEM배양액중배양MEF세포시,원대화전대효과최호,전대지제3～5대시세포생장증식최왕성,처우대수분렬기,괄의작위사양층세포여체세포핵이식세포핵공체.
