CAJ | 학술논문

目的:新近研究发现EGFL7蛋白与肝癌密切相关.本研究对基因egfl7进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR方法,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增egfl7目的片段,利用基因重组技术构建pET21a(+)-TRX-EGFL7原核表达载体,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白EGFL7,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中EGFL7蛋白水平.结果:成功地构建了原核表达质粒pET21a(+)-TRX-EGFL7.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以包涵体的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组EGFL7蛋白质与预期结果一致,抗血清能够特异地识别重组蛋白和血清蛋白质.结论:成功制备了EGFL7蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.
목적:신근연구발현EGFL7단백여간암밀절상관.본연구대기인egfl7진행극륭、표체병제비다극륭항체,위진일보연구기공능전정기출.방법:통과RT-PCR방법,종인간암세포계HepG2세포중확증egfl7목적편단,이용기인중조기술구건pET21a(+)-TRX-EGFL7원핵표체재체,용IPTG유도기재대장간균BL21(DE3)중표체.His-tag자주순화시제합순화중조단백EGFL7,SDS-PAGE감정.장순화적중조단백면역BALB/c소서제비다극륭항체,채용ELISA、Western blot방법검측항체적령민도화특이성,병측정림상혈청표본중EGFL7단백수평.결과:성공지구건료원핵표체질립pET21a(+)-TRX-EGFL7.병재대장간균BL21(DE3)내득이고효표체,차이포함체적형식존재.SDS-PAGE화Western blot증실,중조EGFL7단백질여예기결과일치,항혈청능구특이지식별중조단백화혈청단백질.결론:성공제비료EGFL7단백질화다극륭항체,능용우후속연구.