中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
12期
974-978
,共5页
张龙%刘建波%黄立平%郭龙军%危艳武%唐青海%吴洪丽%刘长明
張龍%劉建波%黃立平%郭龍軍%危豔武%唐青海%吳洪麗%劉長明
장룡%류건파%황립평%곽룡군%위염무%당청해%오홍려%류장명
猪输血传播病毒1型%重组Cap蛋白%单克隆抗体
豬輸血傳播病毒1型%重組Cap蛋白%單剋隆抗體
저수혈전파병독1형%중조Cap단백%단극륭항체
为制备抗猪输血传播病毒1型(TTV1) Cap蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用PCR法扩增TTV1ORF1 (1501nt～2475nt)编码重组Cap蛋白的C末端截短序列,将PCR产物克隆于pGEX-6P-1载体中,并在大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株中诱导表达,获得含GST标签的重组蛋白(rCap),经SDS-PAGE和western blot鉴定表明rCap约为64.0.ku,以包涵体形式存在.用纯化的rCap免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得8株稳定分泌抗rCap蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚类均为IgGl/κ型;western blot鉴定表明有7株MAbs与rCap产生特异性反应,另1株MAb呈阴性.为验证8株MAbs与真核表达的Cap蛋白的免疫反应性,将全长与截短的TTV1ORF1基因片段克隆于pcDNA3.1载体,转染293T细胞进行蛋白瞬时表达,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法检测表明,这8株MAbs均能够与瞬时表达的全长rCap产生特异性反应,其中6株与截短表达的rCap反应.本研究表达的rCap蛋白及制备的MAbs,为该病毒检测方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础.
為製備抗豬輸血傳播病毒1型(TTV1) Cap蛋白的單剋隆抗體(MAb),本研究採用PCR法擴增TTV1ORF1 (1501nt～2475nt)編碼重組Cap蛋白的C末耑截短序列,將PCR產物剋隆于pGEX-6P-1載體中,併在大腸桿菌Rosetta (DE3)菌株中誘導錶達,穫得含GST標籤的重組蛋白(rCap),經SDS-PAGE和western blot鑒定錶明rCap約為64.0.ku,以包涵體形式存在.用純化的rCap免疫BALB/c小鼠,採用淋巴細胞雜交瘤技術穫得8株穩定分泌抗rCap蛋白的雜交瘤細胞株,MAb亞類均為IgGl/κ型;western blot鑒定錶明有7株MAbs與rCap產生特異性反應,另1株MAb呈陰性.為驗證8株MAbs與真覈錶達的Cap蛋白的免疫反應性,將全長與截短的TTV1ORF1基因片段剋隆于pcDNA3.1載體,轉染293T細胞進行蛋白瞬時錶達,採用免疫過氧化物酶單層細胞染色法檢測錶明,這8株MAbs均能夠與瞬時錶達的全長rCap產生特異性反應,其中6株與截短錶達的rCap反應.本研究錶達的rCap蛋白及製備的MAbs,為該病毒檢測方法的建立及抗原錶位的鑒定奠定瞭基礎.
위제비항저수혈전파병독1형(TTV1) Cap단백적단극륭항체(MAb),본연구채용PCR법확증TTV1ORF1 (1501nt～2475nt)편마중조Cap단백적C말단절단서렬,장PCR산물극륭우pGEX-6P-1재체중,병재대장간균Rosetta (DE3)균주중유도표체,획득함GST표첨적중조단백(rCap),경SDS-PAGE화western blot감정표명rCap약위64.0.ku,이포함체형식존재.용순화적rCap면역BALB/c소서,채용림파세포잡교류기술획득8주은정분비항rCap단백적잡교류세포주,MAb아류균위IgGl/κ형;western blot감정표명유7주MAbs여rCap산생특이성반응,령1주MAb정음성.위험증8주MAbs여진핵표체적Cap단백적면역반응성,장전장여절단적TTV1ORF1기인편단극륭우pcDNA3.1재체,전염293T세포진행단백순시표체,채용면역과양화물매단층세포염색법검측표명,저8주MAbs균능구여순시표체적전장rCap산생특이성반응,기중6주여절단표체적rCap반응.본연구표체적rCap단백급제비적MAbs,위해병독검측방법적건립급항원표위적감정전정료기출.
