医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2012年
1期
16-20
,共5页
陈显兵%刘锦红%谭志鑫%袁成福
陳顯兵%劉錦紅%譚誌鑫%袁成福
진현병%류금홍%담지흠%원성복
逆转录病毒载体%shRNA%MCPH1基因%宫颈癌
逆轉錄病毒載體%shRNA%MCPH1基因%宮頸癌
역전록병독재체%shRNA%MCPH1기인%궁경암
目的 建立逆转录病毒介导的MCPH1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌Caski细胞中对MCPH1表达的影响.方法 将人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段重组到逆转录病毒质粒pLNCX2中,构建携带人MCPH1基因RNA干扰的逆转录病毒载体pLNCX2-shRNA-MCPH1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌细胞株Caski细胞,并用G418筛选产生稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western印迹检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 重组逆转录病毒质粒经测序鉴定正确,逆转录病毒感染Caski细胞后用G418筛选出稳定的细胞克隆,RT-PCR和Western印迹检测人MCPH1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组.结论 携带人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段的逆转录病毒感染Caski细胞后能明显抑制MCPH1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础.
目的 建立逆轉錄病毒介導的MCPH1基因RNA榦擾錶達體繫併觀察其在宮頸癌Caski細胞中對MCPH1錶達的影響.方法 將人MCPH1基因RNA榦擾雙鏈DNA片段重組到逆轉錄病毒質粒pLNCX2中,構建攜帶人MCPH1基因RNA榦擾的逆轉錄病毒載體pLNCX2-shRNA-MCPH1,經PT67細胞包裝後,產生的重組逆轉錄病毒感染宮頸癌細胞株Caski細胞,併用G418篩選產生穩定的細胞剋隆,用RT-PCR和Western印跡檢測細胞中MCPH1 mRNA和蛋白錶達的變化.結果 重組逆轉錄病毒質粒經測序鑒定正確,逆轉錄病毒感染Caski細胞後用G418篩選齣穩定的細胞剋隆,RT-PCR和Western印跡檢測人MCPH1 mRNA和蛋白錶達水平明顯低于陰性對照組和未榦擾組.結論 攜帶人MCPH1基因RNA榦擾雙鏈DNA片段的逆轉錄病毒感染Caski細胞後能明顯抑製MCPH1 mRNA和蛋白錶達,為進一步研究MCPH1在宮頸癌中的作用奠定瞭基礎.
목적 건립역전록병독개도적MCPH1기인RNA간우표체체계병관찰기재궁경암Caski세포중대MCPH1표체적영향.방법 장인MCPH1기인RNA간우쌍련DNA편단중조도역전록병독질립pLNCX2중,구건휴대인MCPH1기인RNA간우적역전록병독재체pLNCX2-shRNA-MCPH1,경PT67세포포장후,산생적중조역전록병독감염궁경암세포주Caski세포,병용G418사선산생은정적세포극륭,용RT-PCR화Western인적검측세포중MCPH1 mRNA화단백표체적변화.결과 중조역전록병독질립경측서감정정학,역전록병독감염Caski세포후용G418사선출은정적세포극륭,RT-PCR화Western인적검측인MCPH1 mRNA화단백표체수평명현저우음성대조조화미간우조.결론 휴대인MCPH1기인RNA간우쌍련DNA편단적역전록병독감염Caski세포후능명현억제MCPH1 mRNA화단백표체,위진일보연구MCPH1재궁경암중적작용전정료기출.
