中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2005年
43期
3079-3083
,共5页
刘顺爱%魏红山%董庆鸣%郭晶晶%秦靖%张黔英%刘志英%闫杰%成军
劉順愛%魏紅山%董慶鳴%郭晶晶%秦靖%張黔英%劉誌英%閆傑%成軍
류순애%위홍산%동경명%곽정정%진정%장검영%류지영%염걸%성군
肝炎病毒,乙型%质粒%转染%基因表达
肝炎病毒,乙型%質粒%轉染%基因錶達
간염병독,을형%질립%전염%기인표체
目的观察针对乙型肝炎病毒(HBV)P区基因的RNA干扰(RNAi)表达载体pGE-HBVP在HepG2.2.15(2.2.15)细胞中抑制HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的分泌效应,以阐明HBV P区小干扰RNA(siRNA)抑制HBV复制和蛋白表达的影响.方法构建并鉴定pGE-HBVP,将此载体转染至完整HBV复制模型2.2.15细胞,用化学发光免疫检测法检测并分析转染后不同时间段细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的含量变化,并用免疫细胞化学方法观察转染后细胞中HBsAg的表达变化.结果成功构建了5个针对HBV P区的RNAi表达载体pGE-HBVP1～pGE-HBVP5,其中pGE-HBVP1和pGE-HBVP2具有明显的HBsAg和HBeAg分泌抑制效应和表达抑制效应.抑制率最高的pGE-HBVP2在转染2.2.15细胞效率为30%～40%的基础上,转染后24、48、72和96 h培养上清中的HBsAg分泌抑制率分别为28.88%、32.28%、29.10%和18.42%,HBeAg的分泌抑制率分别为38.33%、27.50%、33.41%和12.60%.细胞免疫细胞化学结果显示,pGE-1空载体转染后2.2.15细胞的HBsAg的表达阳性率约为82%,而pGE-HBVP2转染后2.2.15细胞的HBsAg的表达阳性率约为50%,和pGE-1空载体相比阳性率显著下降.结论针对HBV P区的RNAi可以抑制HBV病毒抗原的分泌和表达.
目的觀察針對乙型肝炎病毒(HBV)P區基因的RNA榦擾(RNAi)錶達載體pGE-HBVP在HepG2.2.15(2.2.15)細胞中抑製HBV錶麵抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的分泌效應,以闡明HBV P區小榦擾RNA(siRNA)抑製HBV複製和蛋白錶達的影響.方法構建併鑒定pGE-HBVP,將此載體轉染至完整HBV複製模型2.2.15細胞,用化學髮光免疫檢測法檢測併分析轉染後不同時間段細胞培養上清中HBsAg和HBeAg的含量變化,併用免疫細胞化學方法觀察轉染後細胞中HBsAg的錶達變化.結果成功構建瞭5箇針對HBV P區的RNAi錶達載體pGE-HBVP1～pGE-HBVP5,其中pGE-HBVP1和pGE-HBVP2具有明顯的HBsAg和HBeAg分泌抑製效應和錶達抑製效應.抑製率最高的pGE-HBVP2在轉染2.2.15細胞效率為30%～40%的基礎上,轉染後24、48、72和96 h培養上清中的HBsAg分泌抑製率分彆為28.88%、32.28%、29.10%和18.42%,HBeAg的分泌抑製率分彆為38.33%、27.50%、33.41%和12.60%.細胞免疫細胞化學結果顯示,pGE-1空載體轉染後2.2.15細胞的HBsAg的錶達暘性率約為82%,而pGE-HBVP2轉染後2.2.15細胞的HBsAg的錶達暘性率約為50%,和pGE-1空載體相比暘性率顯著下降.結論針對HBV P區的RNAi可以抑製HBV病毒抗原的分泌和錶達.
목적관찰침대을형간염병독(HBV)P구기인적RNA간우(RNAi)표체재체pGE-HBVP재HepG2.2.15(2.2.15)세포중억제HBV표면항원(HBsAg)화e항원(HBeAg)적분비효응,이천명HBV P구소간우RNA(siRNA)억제HBV복제화단백표체적영향.방법구건병감정pGE-HBVP,장차재체전염지완정HBV복제모형2.2.15세포,용화학발광면역검측법검측병분석전염후불동시간단세포배양상청중HBsAg화HBeAg적함량변화,병용면역세포화학방법관찰전염후세포중HBsAg적표체변화.결과성공구건료5개침대HBV P구적RNAi표체재체pGE-HBVP1～pGE-HBVP5,기중pGE-HBVP1화pGE-HBVP2구유명현적HBsAg화HBeAg분비억제효응화표체억제효응.억제솔최고적pGE-HBVP2재전염2.2.15세포효솔위30%～40%적기출상,전염후24、48、72화96 h배양상청중적HBsAg분비억제솔분별위28.88%、32.28%、29.10%화18.42%,HBeAg적분비억제솔분별위38.33%、27.50%、33.41%화12.60%.세포면역세포화학결과현시,pGE-1공재체전염후2.2.15세포적HBsAg적표체양성솔약위82%,이pGE-HBVP2전염후2.2.15세포적HBsAg적표체양성솔약위50%,화pGE-1공재체상비양성솔현저하강.결론침대HBV P구적RNAi가이억제HBV병독항원적분비화표체.
