生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
5期
713-719
,共7页
任鹏康%王丰%李惠明%李宗海%黄倩
任鵬康%王豐%李惠明%李宗海%黃倩
임붕강%왕봉%리혜명%리종해%황천
腺病毒%表皮生长因子受体%基因治疗%柯萨奇病毒-腺病毒受体
腺病毒%錶皮生長因子受體%基因治療%柯薩奇病毒-腺病毒受體
선병독%표피생장인자수체%기인치료%가살기병독-선병독수체
为了提高腺病毒载体用于基因治疗的靶向性,采用PCR和体外连接的方法构建了柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackie virus-Adenovirus Receptor)胞外段sCAR和表皮生长因子(Epidermal growth factor)EGF融合基因,然后将此融合基因插入穿梭质粒pDC315.利用Ad-MAX腺病毒系统,将重组质粒pDC315-sCAR-EGF与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE13cre共同转染AD-293细胞,成功包装出一种复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-sCAR-EGF.经PCR鉴定该病毒含有sCAR-EGF融合基因片段,Western blotting证实该病毒能表达sCAR-EGF融合蛋白.体外试验证实该病毒感染细胞所产生的融合蛋白能够引导携带报告基因的腺病毒Ad5-CMV-luc高水平感染肿瘤细胞,为高水平表达EGFR的肿瘤的靶向性基因治疗提供了新的手段.
為瞭提高腺病毒載體用于基因治療的靶嚮性,採用PCR和體外連接的方法構建瞭柯薩奇病毒-腺病毒受體(Coxsackie virus-Adenovirus Receptor)胞外段sCAR和錶皮生長因子(Epidermal growth factor)EGF融閤基因,然後將此融閤基因插入穿梭質粒pDC315.利用Ad-MAX腺病毒繫統,將重組質粒pDC315-sCAR-EGF與腺病毒骨架質粒pBHGloxΔE13cre共同轉染AD-293細胞,成功包裝齣一種複製缺陷型腺病毒Ad5-CMV-sCAR-EGF.經PCR鑒定該病毒含有sCAR-EGF融閤基因片段,Western blotting證實該病毒能錶達sCAR-EGF融閤蛋白.體外試驗證實該病毒感染細胞所產生的融閤蛋白能夠引導攜帶報告基因的腺病毒Ad5-CMV-luc高水平感染腫瘤細胞,為高水平錶達EGFR的腫瘤的靶嚮性基因治療提供瞭新的手段.
위료제고선병독재체용우기인치료적파향성,채용PCR화체외련접적방법구건료가살기병독-선병독수체(Coxsackie virus-Adenovirus Receptor)포외단sCAR화표피생장인자(Epidermal growth factor)EGF융합기인,연후장차융합기인삽입천사질립pDC315.이용Ad-MAX선병독계통,장중조질립pDC315-sCAR-EGF여선병독골가질립pBHGloxΔE13cre공동전염AD-293세포,성공포장출일충복제결함형선병독Ad5-CMV-sCAR-EGF.경PCR감정해병독함유sCAR-EGF융합기인편단,Western blotting증실해병독능표체sCAR-EGF융합단백.체외시험증실해병독감염세포소산생적융합단백능구인도휴대보고기인적선병독Ad5-CMV-luc고수평감염종류세포,위고수평표체EGFR적종류적파향성기인치료제공료신적수단.
