中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2006年
11期
979-982
,共4页
韩普%莫晓宁%钟丽君%杨彬%马大龙%娄雅欣
韓普%莫曉寧%鐘麗君%楊彬%馬大龍%婁雅訢
한보%막효저%종려군%양빈%마대룡%루아흔
核凋亡诱导因子1%重组蛋白%蛋白纯化%大肠杆菌
覈凋亡誘導因子1%重組蛋白%蛋白純化%大腸桿菌
핵조망유도인자1%중조단백%단백순화%대장간균
目的:核凋亡诱导因子1(Nuclear apoptosis-inducing factor 1, NAIF1)是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因,为了通过Polldown实验研究其结合蛋白,在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1(73-327)的截短体.方法:通过PCR方法扩增出NAIF1(73-327)cDNA,并插入pGEX-KG载体,实现插入基因的融合表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)检测分析.结果:DNA测序结果证实成功构建了重组融合表达质粒pGEX-KG- NAIF1(73-327),并在大肠杆菌中稳定表达,表达产物分子量约为53 kD,与预期一致,表达量约占菌体总蛋白的22%,纯化蛋白经Western blot和二级质谱(MS/MS)分析证明表达蛋白为GST-NAIF1(73-327)融合蛋白.结论:获得了重组GST-NAIF1(73-327)融合蛋白的高效表达,为下阶段NAIF1的结构与功能研究打下了基础.
目的:覈凋亡誘導因子1(Nuclear apoptosis-inducing factor 1, NAIF1)是本實驗室首次剋隆和鑒定的新凋亡基因,為瞭通過Polldown實驗研究其結閤蛋白,在大腸桿菌中錶達和純化人重組NAIF1(73-327)的截短體.方法:通過PCR方法擴增齣NAIF1(73-327)cDNA,併插入pGEX-KG載體,實現插入基因的融閤錶達,對錶達產物進行SDS-PAGE、Western blot和電噴霧電離-四極桿-飛行時間質譜(ESI-Q-TOF-MS/MS)檢測分析.結果:DNA測序結果證實成功構建瞭重組融閤錶達質粒pGEX-KG- NAIF1(73-327),併在大腸桿菌中穩定錶達,錶達產物分子量約為53 kD,與預期一緻,錶達量約佔菌體總蛋白的22%,純化蛋白經Western blot和二級質譜(MS/MS)分析證明錶達蛋白為GST-NAIF1(73-327)融閤蛋白.結論:穫得瞭重組GST-NAIF1(73-327)融閤蛋白的高效錶達,為下階段NAIF1的結構與功能研究打下瞭基礎.
목적:핵조망유도인자1(Nuclear apoptosis-inducing factor 1, NAIF1)시본실험실수차극륭화감정적신조망기인,위료통과Polldown실험연구기결합단백,재대장간균중표체화순화인중조NAIF1(73-327)적절단체.방법:통과PCR방법확증출NAIF1(73-327)cDNA,병삽입pGEX-KG재체,실현삽입기인적융합표체,대표체산물진행SDS-PAGE、Western blot화전분무전리-사겁간-비행시간질보(ESI-Q-TOF-MS/MS)검측분석.결과:DNA측서결과증실성공구건료중조융합표체질립pGEX-KG- NAIF1(73-327),병재대장간균중은정표체,표체산물분자량약위53 kD,여예기일치,표체량약점균체총단백적22%,순화단백경Western blot화이급질보(MS/MS)분석증명표체단백위GST-NAIF1(73-327)융합단백.결론:획득료중조GST-NAIF1(73-327)융합단백적고효표체,위하계단NAIF1적결구여공능연구타하료기출.
