泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2008年
3期
237-243
,共7页
范贤明%周玲%王文军%曾鸣%朱晨%徐萧洪%湛晓勤
範賢明%週玲%王文軍%曾鳴%硃晨%徐蕭洪%湛曉勤
범현명%주령%왕문군%증명%주신%서소홍%담효근
肺纤维化%STAT1%反义寡核苷酸%雾化吸入
肺纖維化%STAT1%反義寡覈苷痠%霧化吸入
폐섬유화%STAT1%반의과핵감산%무화흡입
目的:探讨信号转导和转录活化因子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入体内转染博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的可行性并给予鉴定.方法:取Wistar大鼠20只,气管内灌注BLM 7天后,将大鼠随机分为生理盐水(NS)组、脂质体(liposome,LP)组、ASON组、5'端异硫氰酸荧光素(FITC)标记的STAT1-ASON(FITC-ASON)组各5只.FITC-ASON组大鼠于气管内灌注BLM后第7天,雾化吸入脂质体包埋全硫代磷酸修饰并5'端FITC标记的STAT1-ASON后6小时处死大鼠,通过支气管肺泡灌洗收集细胞,用荧光显微镜观察灌洗液细胞和肺组织内STAT1-ASON的分布.NS组、LP组、ASON组3组大鼠则于气管内灌注BLM后第7、9、11、13天分别雾化吸入生理盐水、脂质体、脂质体包埋的STAT1-ASON复合物,3组大鼠于第14天处死,通过支气管肺泡灌洗收集肺泡巨噬细胞(AM),用实时荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)检测AM中STAT1、ICAM-1 mRNA的表达;用Western-blot检测AM中STAT1、ICAM-1蛋白的表达;并检测大鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr).结果:大鼠雾化吸入5'端FITC标记的STAT1-ASON后,其支气管肺泡灌洗液细胞和肺组织中可见诱发的黄绿色荧光且主要位于AM内;NS组AM中STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达水平(1.003±0.116、1.008±0.114;0.66±0.09、0.72±0.10)与LP组(1.063±0.121、1.000±0.157;0.68±0.11、0.65±0.11)比较差异无统计学意义(P>0.05);ASON组(0.267±0.036、0.269±0.042;0.31±0.09、0.38±0.07)与NS组及LP组比较,AM中STAT1、ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);ASON组、NS组及LP组3组肝肾功能指标两两比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:脂质体包裹的STAT1-ASON雾化吸入能够到达AM和肺组织内,用于体内实验是安全的;STAT1-ASON体内转染后,能抑制AM中STAT1、ICAM-1 mRNA蛋白的表达,说明STAT1-ASON雾化吸入体内转染致肺纤维化动物模型是可行的.
目的:探討信號轉導和轉錄活化因子1(STAT1)反義寡覈苷痠(ASON)霧化吸入體內轉染博萊黴素(BLM)緻大鼠肺纖維化的可行性併給予鑒定.方法:取Wistar大鼠20隻,氣管內灌註BLM 7天後,將大鼠隨機分為生理鹽水(NS)組、脂質體(liposome,LP)組、ASON組、5'耑異硫氰痠熒光素(FITC)標記的STAT1-ASON(FITC-ASON)組各5隻.FITC-ASON組大鼠于氣管內灌註BLM後第7天,霧化吸入脂質體包埋全硫代燐痠脩飾併5'耑FITC標記的STAT1-ASON後6小時處死大鼠,通過支氣管肺泡灌洗收集細胞,用熒光顯微鏡觀察灌洗液細胞和肺組織內STAT1-ASON的分佈.NS組、LP組、ASON組3組大鼠則于氣管內灌註BLM後第7、9、11、13天分彆霧化吸入生理鹽水、脂質體、脂質體包埋的STAT1-ASON複閤物,3組大鼠于第14天處死,通過支氣管肺泡灌洗收集肺泡巨噬細胞(AM),用實時熒光定量聚閤酶聯反應(FQ-PCR)檢測AM中STAT1、ICAM-1 mRNA的錶達;用Western-blot檢測AM中STAT1、ICAM-1蛋白的錶達;併檢測大鼠血清肝功能指標丙氨痠轉氨酶(ALT)、天門鼕氨痠轉氨酶(AST)和腎功能指標尿素氮(BUN)、肌酐(Scr).結果:大鼠霧化吸入5'耑FITC標記的STAT1-ASON後,其支氣管肺泡灌洗液細胞和肺組織中可見誘髮的黃綠色熒光且主要位于AM內;NS組AM中STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白錶達水平(1.003±0.116、1.008±0.114;0.66±0.09、0.72±0.10)與LP組(1.063±0.121、1.000±0.157;0.68±0.11、0.65±0.11)比較差異無統計學意義(P>0.05);ASON組(0.267±0.036、0.269±0.042;0.31±0.09、0.38±0.07)與NS組及LP組比較,AM中STAT1、ICAM-1 mRNA和蛋白錶達水平均顯著下降(P<0.05);ASON組、NS組及LP組3組肝腎功能指標兩兩比較差異無統計學意義(P>0.05).結論:脂質體包裹的STAT1-ASON霧化吸入能夠到達AM和肺組織內,用于體內實驗是安全的;STAT1-ASON體內轉染後,能抑製AM中STAT1、ICAM-1 mRNA蛋白的錶達,說明STAT1-ASON霧化吸入體內轉染緻肺纖維化動物模型是可行的.
목적:탐토신호전도화전록활화인자1(STAT1)반의과핵감산(ASON)무화흡입체내전염박래매소(BLM)치대서폐섬유화적가행성병급여감정.방법:취Wistar대서20지,기관내관주BLM 7천후,장대서수궤분위생리염수(NS)조、지질체(liposome,LP)조、ASON조、5'단이류청산형광소(FITC)표기적STAT1-ASON(FITC-ASON)조각5지.FITC-ASON조대서우기관내관주BLM후제7천,무화흡입지질체포매전류대린산수식병5'단FITC표기적STAT1-ASON후6소시처사대서,통과지기관폐포관세수집세포,용형광현미경관찰관세액세포화폐조직내STAT1-ASON적분포.NS조、LP조、ASON조3조대서칙우기관내관주BLM후제7、9、11、13천분별무화흡입생리염수、지질체、지질체포매적STAT1-ASON복합물,3조대서우제14천처사,통과지기관폐포관세수집폐포거서세포(AM),용실시형광정량취합매련반응(FQ-PCR)검측AM중STAT1、ICAM-1 mRNA적표체;용Western-blot검측AM중STAT1、ICAM-1단백적표체;병검측대서혈청간공능지표병안산전안매(ALT)、천문동안산전안매(AST)화신공능지표뇨소담(BUN)、기항(Scr).결과:대서무화흡입5'단FITC표기적STAT1-ASON후,기지기관폐포관세액세포화폐조직중가견유발적황록색형광차주요위우AM내;NS조AM중STAT1、ICAM-1mRNA화단백표체수평(1.003±0.116、1.008±0.114;0.66±0.09、0.72±0.10)여LP조(1.063±0.121、1.000±0.157;0.68±0.11、0.65±0.11)비교차이무통계학의의(P>0.05);ASON조(0.267±0.036、0.269±0.042;0.31±0.09、0.38±0.07)여NS조급LP조비교,AM중STAT1、ICAM-1 mRNA화단백표체수평균현저하강(P<0.05);ASON조、NS조급LP조3조간신공능지표량량비교차이무통계학의의(P>0.05).결론:지질체포과적STAT1-ASON무화흡입능구도체AM화폐조직내,용우체내실험시안전적;STAT1-ASON체내전염후,능억제AM중STAT1、ICAM-1 mRNA단백적표체,설명STAT1-ASON무화흡입체내전염치폐섬유화동물모형시가행적.
