生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
10期
1714-1722
,共9页
孙建富%赵和平%李娜%孙元%夏照和%周艳君%王煜%祁巧芬%鲁承%仇华吉
孫建富%趙和平%李娜%孫元%夏照和%週豔君%王煜%祁巧芬%魯承%仇華吉
손건부%조화평%리나%손원%하조화%주염군%왕욱%기교분%로승%구화길
"自杀性"DNA疫苗%猪繁殖与呼吸综合征病毒%猪瘟病毒%泛DR表位%VP22转导蛋白%共表达
"自殺性"DNA疫苗%豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%豬瘟病毒%汎DR錶位%VP22轉導蛋白%共錶達
"자살성"DNA역묘%저번식여호흡종합정병독%저온병독%범DR표위%VP22전도단백%공표체
为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中.为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒.间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达,将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫.结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖:部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组.结果表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答.
為瞭穫得新型雙價"自殺性"DNA疫苗,將豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus,PRRSV)GP5基因剋隆于此前構建的錶達豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒複製子載體疫苗pSFV1CS-E2中.為瞭增彊免疫效果,在密碼子優化的GP5基因中插入瞭汎DR錶位(PADRE),在CSFV E2基因後融閤偽狂犬病病毒(PrV)UL49基因,穫得瞭6種重組質粒.間接免疫熒光試驗顯示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬時轉染的293T細胞中得到同時錶達,將6種重組質粒和空載體pSFV1CS分彆免疫BALB/c小鼠,用間接ELISA方法檢測血清抗體水平,通過基于CSFE/WST-8的淋巴細胞增殖試驗和細胞因子ELISA評價疫苗誘導的細胞免疫.結果顯示,除pSFV1CS組外,從各疫苗組小鼠血清中均可檢測到低水平的針對GP5和E2蛋白的抗體;各疫苗組小鼠脾細胞經CSFV和PRRSV刺激後均能誘導特異性的淋巴細胞增殖:部分疫苗組小鼠脾細胞經CSFV和PRRSV刺激後可分泌較高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗組細胞免疫應答顯著高于其它疫苗組.結果錶明,這些共錶達GP5和E2蛋白的自殺性DNA疫苗可以誘導體液免疫和細胞免疫,PrV UL49可以增彊其細胞免疫應答.
위료획득신형쌍개"자살성"DNA역묘,장저번식여호흡종합정병독(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus,PRRSV)GP5기인극륭우차전구건적표체저온병독(Classical swine fever virus,CSFV)E2기인적갑병독복제자재체역묘pSFV1CS-E2중.위료증강면역효과,재밀마자우화적GP5기인중삽입료범DR표위(PADRE),재CSFV E2기인후융합위광견병병독(PrV)UL49기인,획득료6충중조질립.간접면역형광시험현시,PRRSV GP5화CSFV E2기인재순시전염적293T세포중득도동시표체,장6충중조질립화공재체pSFV1CS분별면역BALB/c소서,용간접ELISA방법검측혈청항체수평,통과기우CSFE/WST-8적림파세포증식시험화세포인자ELISA평개역묘유도적세포면역.결과현시,제pSFV1CS조외,종각역묘조소서혈청중균가검측도저수평적침대GP5화E2단백적항체;각역묘조소서비세포경CSFV화PRRSV자격후균능유도특이성적림파세포증식:부분역묘조소서비세포경CSFV화PRRSV자격후가분비교고수평적IFN-γ화IL-4;인입UL49적역묘조세포면역응답현저고우기타역묘조.결과표명,저사공표체GP5화E2단백적자살성DNA역묘가이유도체액면역화세포면역,PrV UL49가이증강기세포면역응답.
