中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
10期
865-868
,共4页
高世同%张仁利%刘会娟%秦莉%耿艺介%黄达娜%吴少庭
高世同%張仁利%劉會娟%秦莉%耿藝介%黃達娜%吳少庭
고세동%장인리%류회연%진리%경예개%황체나%오소정
金黄葡萄球菌%肠毒素B%表达%纯化
金黃葡萄毬菌%腸毒素B%錶達%純化
금황포도구균%장독소B%표체%순화
目的 在大肠埃希菌中表达金黄葡萄球菌野生株肠毒素B(SEB)重组蛋白,并进行纯化.方法 采用PCR方法 从金黄葡萄球菌基因组中扩增出SEB基因片段,与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMDi8-T/SEB,测序分析后,亚克隆入表达载体pGEX4T-2,转化感受态E coli JM109,IPTG诱导表达.表达产物采用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit纯化后进行Western blot鉴定.结果 SEB基凶扩增片段大小为705 bp,测序结果 显示与金黄葡萄球菌S6株序列相比无碱基的插入或缺失,同源性为98.4%,存在11个碱基变异,其中7个为无义突变,4个为有义突变(突变位点位于第364、699、899和988位,编码氨基酸变化分别为:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser和Met→Leu);表达的含GST的融合蛋白相对分子质量约53 000,纯化后经SDS-PAGE分析,可见单一条带.Western blot显示表达产物可被兔抗SEB抗体所识别.结论已成功表达并纯化了金黄葡萄球菌野生株SEB重组蛋白,为开发SEB免疫诊断试剂提供了材料.
目的 在大腸埃希菌中錶達金黃葡萄毬菌野生株腸毒素B(SEB)重組蛋白,併進行純化.方法 採用PCR方法 從金黃葡萄毬菌基因組中擴增齣SEB基因片段,與pMD18-T載體連接,構建重組質粒pMDi8-T/SEB,測序分析後,亞剋隆入錶達載體pGEX4T-2,轉化感受態E coli JM109,IPTG誘導錶達.錶達產物採用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit純化後進行Western blot鑒定.結果 SEB基兇擴增片段大小為705 bp,測序結果 顯示與金黃葡萄毬菌S6株序列相比無堿基的插入或缺失,同源性為98.4%,存在11箇堿基變異,其中7箇為無義突變,4箇為有義突變(突變位點位于第364、699、899和988位,編碼氨基痠變化分彆為:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser和Met→Leu);錶達的含GST的融閤蛋白相對分子質量約53 000,純化後經SDS-PAGE分析,可見單一條帶.Western blot顯示錶達產物可被兔抗SEB抗體所識彆.結論已成功錶達併純化瞭金黃葡萄毬菌野生株SEB重組蛋白,為開髮SEB免疫診斷試劑提供瞭材料.
목적 재대장애희균중표체금황포도구균야생주장독소B(SEB)중조단백,병진행순화.방법 채용PCR방법 종금황포도구균기인조중확증출SEB기인편단,여pMD18-T재체련접,구건중조질립pMDi8-T/SEB,측서분석후,아극륭입표체재체pGEX4T-2,전화감수태E coli JM109,IPTG유도표체.표체산물채용B-PER GST Fusion Protein Purification Kit순화후진행Western blot감정.결과 SEB기흉확증편단대소위705 bp,측서결과 현시여금황포도구균S6주서렬상비무감기적삽입혹결실,동원성위98.4%,존재11개감기변이,기중7개위무의돌변,4개위유의돌변(돌변위점위우제364、699、899화988위,편마안기산변화분별위:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser화Met→Leu);표체적함GST적융합단백상대분자질량약53 000,순화후경SDS-PAGE분석,가견단일조대.Western blot현시표체산물가피토항SEB항체소식별.결론이성공표체병순화료금황포도구균야생주SEB중조단백,위개발SEB면역진단시제제공료재료.
