CAJ | 학술논문

目的:构建抗乙型肝炎病毒(HBV)的治疗性 DNA 疫苗并进行体外、体内鉴定.方法:采用 PCR 技术扩增含有HBV包膜中蛋白(preS2.S)抗原基因和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白的基因,将目的基因分别亚克隆于 pVAXl 真核表达载体,并进行酶切和测序分析;转染双质粒于 COS-7 细胞检测基因及蛋白表达情况;利用 Combinatotial Extension(CE)软件模建分析佐剂质粒表达融合蛋白的空间结构;双质粒联合在体电脉冲技术(EP)注射BALB/c小鼠以检测特异性的体液和细胞免疫应答.结果:经酶谱和测序分析表明,构建的双质粒 pVAXl/S2.S(pS2.s)和 pYAXl/IL-2IFN-γ(pⅡF)的基因片段的方向、序列完全正确;ELISA法定量检测双质粒转染COS-7细胞后48小时目的基因(preS2.S和hIL-2/hIFN-γ)的蛋白表达水平较高,HBsAg、IL-2、IFN-γ的含量分别为45.1、10.03、11.5 ng/ml;模拟空间结构分析表明佐剂质粒的融合蛋白中两细胞因子的活性部位均裸露在外;小鼠免疫试验结果表明,疫苗 pS2.S 能诱导健康小鼠的保护性抗-HBs 的抗体产生,且具有剂量相关性;佐剂pⅡF可显著增强疫苗pS2.S质粒的免疫效果;在口辅助作用下,质粒pS2.S和pⅡF 共肌注BALB/c小鼠,低剂量就能诱导较强特异性的细胞和体液免疫.结论:成功构建了抗HBV的DNA疫苗ps2.S及佐剂pⅡF 质粒,并具有较特异的体内外活性.
목적:구건항을형간염병독(HBV)적치료성 DNA 역묘병진행체외、체내감정.방법:채용 PCR 기술확증함유HBV포막중단백(preS2.S)항원기인화hIL-2/hIFN-γ융합단백적기인,장목적기인분별아극륭우 pVAXl 진핵표체재체,병진행매절화측서분석;전염쌍질립우 COS-7 세포검측기인급단백표체정황;이용 Combinatotial Extension(CE)연건모건분석좌제질립표체융합단백적공간결구;쌍질립연합재체전맥충기술(EP)주사BALB/c소서이검측특이성적체액화세포면역응답.결과:경매보화측서분석표명,구건적쌍질립 pVAXl/S2.S(pS2.s)화 pYAXl/IL-2IFN-γ(pⅡF)적기인편단적방향、서렬완전정학;ELISA법정량검측쌍질립전염COS-7세포후48소시목적기인(preS2.S화hIL-2/hIFN-γ)적단백표체수평교고,HBsAg、IL-2、IFN-γ적함량분별위45.1、10.03、11.5 ng/ml;모의공간결구분석표명좌제질립적융합단백중량세포인자적활성부위균라로재외;소서면역시험결과표명,역묘 pS2.S 능유도건강소서적보호성항-HBs 적항체산생,차구유제량상관성;좌제pⅡF가현저증강역묘pS2.S질립적면역효과;재구보조작용하,질립pS2.S화pⅡF 공기주BALB/c소서,저제량취능유도교강특이성적세포화체액면역.결론:성공구건료항HBV적DNA역묘ps2.S급좌제pⅡF 질립,병구유교특이적체내외활성.