福建农林大学学报（自然科学版）
福建農林大學學報（自然科學版）
복건농림대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURE AND FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2009年
3期
255-259
,共5页
陈建秋%艾育芳%潘大仁%周以飞%潘菲%林彬辉%郭玉春
陳建鞦%艾育芳%潘大仁%週以飛%潘菲%林彬輝%郭玉春
진건추%애육방%반대인%주이비%반비%림빈휘%곽옥춘
睾丸酮丛毛单胞菌%teiR%SDS-PAGE%多克隆抗体
睪汍酮叢毛單胞菌%teiR%SDS-PAGE%多剋隆抗體
고환동총모단포균%teiR%SDS-PAGE%다극륭항체
提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)基因组DNA,PCR扩增teiR基因,将扩增产物克隆到pET28a中,经酶切验证后获得teiR基因表达载体pET28a-teiR.将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,添加终浓度为1 mmol·L-1的IPTG进行诱导,提取细菌总蛋白进行蛋白的SDS-PAGE电泳.并根据融合蛋白特性,利用Ni-NTA Spin Column对TeiR融合蛋白进行分离纯化,经分离纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出单一条带.进一步以获得的TeiR融合蛋白为抗原,制备兔抗TeiR多克隆抗体,经ELISA测定该抗体的效价为1∶10000,该抗体与睾丸酮丛毛单胞菌天然TeiR蛋白反应良好,说明该抗体特异性良好.
提取睪汍酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni)基因組DNA,PCR擴增teiR基因,將擴增產物剋隆到pET28a中,經酶切驗證後穫得teiR基因錶達載體pET28a-teiR.將重組質粒轉化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21,添加終濃度為1 mmol·L-1的IPTG進行誘導,提取細菌總蛋白進行蛋白的SDS-PAGE電泳.併根據融閤蛋白特性,利用Ni-NTA Spin Column對TeiR融閤蛋白進行分離純化,經分離純化後的重組蛋白在SDS-PAGE上呈現齣單一條帶.進一步以穫得的TeiR融閤蛋白為抗原,製備兔抗TeiR多剋隆抗體,經ELISA測定該抗體的效價為1∶10000,該抗體與睪汍酮叢毛單胞菌天然TeiR蛋白反應良好,說明該抗體特異性良好.
제취고환동총모단포균(Comamonas testosteroni)기인조DNA,PCR확증teiR기인,장확증산물극륭도pET28a중,경매절험증후획득teiR기인표체재체pET28a-teiR.장중조질립전화대장간균(Escherichia coli)BL21,첨가종농도위1 mmol·L-1적IPTG진행유도,제취세균총단백진행단백적SDS-PAGE전영.병근거융합단백특성,이용Ni-NTA Spin Column대TeiR융합단백진행분리순화,경분리순화후적중조단백재SDS-PAGE상정현출단일조대.진일보이획득적TeiR융합단백위항원,제비토항TeiR다극륭항체,경ELISA측정해항체적효개위1∶10000,해항체여고환동총모단포균천연TeiR단백반응량호,설명해항체특이성량호.
