华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2010年
5期
632-634,666
,共4页
胡沙%于利利%李智敏%韩方%吴莉英%黄在菊%王泽华
鬍沙%于利利%李智敏%韓方%吳莉英%黃在菊%王澤華
호사%우리리%리지민%한방%오리영%황재국%왕택화
EZH2%卵巢癌%RNA干扰%载体构建
EZH2%卵巢癌%RNA榦擾%載體構建
EZH2%란소암%RNA간우%재체구건
目的 采用基因工程技术,构建EZH2 shRNA的真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的卵巢癌A2780细胞系.方法 合成特异性干扰EZH2的shRNA片段并定向克隆插入Supersilencing shRNA质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo,获得表达载体pGPU6/GFP/Neo-shEZH2.脂质体介导重组质粒转染A2780细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,Real time RT-PCR和Western blot检测转染后细胞系EZH2的表达.结果 测序结果证实重组载体构建成功,稳定转染shEZH2的A2780细胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P＜0.01,差异有统计学意义. 结论成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的A2780细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的卵巢癌治疗奠定实验基础.
目的 採用基因工程技術,構建EZH2 shRNA的真覈錶達載體,穫得穩定錶達榦擾質粒的卵巢癌A2780細胞繫.方法 閤成特異性榦擾EZH2的shRNA片段併定嚮剋隆插入Supersilencing shRNA質粒錶達載體pGPU6/GFP/Neo,穫得錶達載體pGPU6/GFP/Neo-shEZH2.脂質體介導重組質粒轉染A2780細胞,經G418加壓篩選穫得穩定轉染細胞株,Real time RT-PCR和Western blot檢測轉染後細胞繫EZH2的錶達.結果 測序結果證實重組載體構建成功,穩定轉染shEZH2的A2780細胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P＜0.01,差異有統計學意義. 結論成功構建EZH2 shRNA錶達載體,穫得EZH2基因穩定沉默的A2780細胞繫,為進一步研究以EZH2為靶點的卵巢癌治療奠定實驗基礎.
목적 채용기인공정기술,구건EZH2 shRNA적진핵표체재체,획득은정표체간우질립적란소암A2780세포계.방법 합성특이성간우EZH2적shRNA편단병정향극륭삽입Supersilencing shRNA질립표체재체pGPU6/GFP/Neo,획득표체재체pGPU6/GFP/Neo-shEZH2.지질체개도중조질립전염A2780세포,경G418가압사선획득은정전염세포주,Real time RT-PCR화Western blot검측전염후세포계EZH2적표체.결과 측서결과증실중조재체구건성공,은정전염shEZH2적A2780세포EZH2적mRNA화단백수평하강(90.20±1.66)%화(73.80±5.49)%,P＜0.01,차이유통계학의의. 결론성공구건EZH2 shRNA표체재체,획득EZH2기인은정침묵적A2780세포계,위진일보연구이EZH2위파점적란소암치료전정실험기출.
