CAJ | 학술논문

目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型.方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定.纯化的pmROP-EGFP表达质粒经NotⅠ酶切线性化后,用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核,制作转基因小鼠.新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建者小鼠, 基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传代后, 取眼球进行冰冻切片, 在荧光显微镜下观察视网膜上GFP的表达.结果:从基因组内扩增出了2.1 kb的小鼠ROP,成功构建了小鼠ROP-GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP.获得了3只转基因小鼠首建者,分别命名为C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU21、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27.结论:成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠,它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制,还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型.
목적:종소서기인조중극륭소서시단백기인계동자(ROP)병건립ROP-록색형광단백(GFP)융합기인전기인소서모형.방법:용PCR법종기인조내확증ROP,통과기인중조적방법구건pmROP-EGFP표체재체,병용한제성내절매소화화DNA측서진행감정.순화적pmROP-EGFP표체질립경NotⅠ매절선성화후,용원핵현미주사적방법장기주사입소서수정란웅원핵,제작전기인소서.신생서통과PCR검측재기인조수평사선수건자소서, 기인조표체양성적소서여정상소서교배전대후, 취안구진행빙동절편, 재형광현미경하관찰시망막상GFP적표체.결과:종기인조내확증출료2.1 kb적소서ROP,성공구건료소서ROP-GFP융합기인표체재체pmROP-EGFP.획득료3지전기인소서수건자,분별명명위C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU21、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27.결론:성공건립료시망막표체GFP단백적C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU전기인소서,타문가용우연구뇌화시망막발육이급시망막병변궤제,환가위진행시망막이식실험제공포유류동물모형.