第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
2期
164-167
,共4页
杨文宇%黄宗海%汤福祥%钱勇%车小燕
楊文宇%黃宗海%湯福祥%錢勇%車小燕
양문우%황종해%탕복상%전용%차소연
肿瘤%基因治疗%自杀基因%腺病毒载体%同源重组
腫瘤%基因治療%自殺基因%腺病毒載體%同源重組
종류%기인치료%자살기인%선병독재체%동원중조
目的采用"两步转化法"高效制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的腺病毒重组载体.方法将质粒pAdEasy-1线性化后转化于BJ5183菌,制备AdEasy-1细菌;自载体pBS-CD中切出CD基因,亚克隆至穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-CD线性化后转化AdEasy-1细菌,抽提同源重组腺病毒质粒,Pac Ⅰ酶切后转染293细胞,在293细胞中包装与扩增,利用GFP报告基因进行滴度测定.同时按"一步转化法"进行同样的重组腺病毒制备,比较二者的优劣性.结果"两步转化法"终产物17个克隆中13个正确,正确率为76.5%(13/17);"一步转化法"重组产物17个克隆中有2个正确,正确率为11.8%(2/17),两者具有显著性差异(P=0.00017).结论"两步转化法"细菌内同源重组是一种更高效、更方便的重组腺病毒制备方法.
目的採用"兩步轉化法"高效製備含胞嘧啶脫氨酶(CD)自殺基因的腺病毒重組載體.方法將質粒pAdEasy-1線性化後轉化于BJ5183菌,製備AdEasy-1細菌;自載體pBS-CD中切齣CD基因,亞剋隆至穿梭質粒pAdtrackCMV上,構建的pAdtrackCMV-CD線性化後轉化AdEasy-1細菌,抽提同源重組腺病毒質粒,Pac Ⅰ酶切後轉染293細胞,在293細胞中包裝與擴增,利用GFP報告基因進行滴度測定.同時按"一步轉化法"進行同樣的重組腺病毒製備,比較二者的優劣性.結果"兩步轉化法"終產物17箇剋隆中13箇正確,正確率為76.5%(13/17);"一步轉化法"重組產物17箇剋隆中有2箇正確,正確率為11.8%(2/17),兩者具有顯著性差異(P=0.00017).結論"兩步轉化法"細菌內同源重組是一種更高效、更方便的重組腺病毒製備方法.
목적채용"량보전화법"고효제비함포밀정탈안매(CD)자살기인적선병독중조재체.방법장질립pAdEasy-1선성화후전화우BJ5183균,제비AdEasy-1세균;자재체pBS-CD중절출CD기인,아극륭지천사질립pAdtrackCMV상,구건적pAdtrackCMV-CD선성화후전화AdEasy-1세균,추제동원중조선병독질립,Pac Ⅰ매절후전염293세포,재293세포중포장여확증,이용GFP보고기인진행적도측정.동시안"일보전화법"진행동양적중조선병독제비,비교이자적우렬성.결과"량보전화법"종산물17개극륭중13개정학,정학솔위76.5%(13/17);"일보전화법"중조산물17개극륭중유2개정학,정학솔위11.8%(2/17),량자구유현저성차이(P=0.00017).결론"량보전화법"세균내동원중조시일충경고효、경방편적중조선병독제비방법.
