生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
3期
348-351
,共4页
杨慧%何丹%晁开%林晴%游松%黄华樑
楊慧%何丹%晁開%林晴%遊鬆%黃華樑
양혜%하단%조개%림청%유송%황화량
CEA%重组免疫毒素%亲和层析%蛋白复性%体外杀伤活性
CEA%重組免疫毒素%親和層析%蛋白複性%體外殺傷活性
CEA%중조면역독소%친화층석%단백복성%체외살상활성
以抗癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)单链抗体与假单胞菌外毒素(Pseudomonas exotoxin A,PEA)的截短和修饰形式PE38/KDEL构建重组免疫毒素CEA/PE38/KDEL,并在大肠杆菌菌株BL21(DE3)-star中表达.采用镍离子螯合层析法纯化变性的包涵体样品,并用连续梯度透析的方法对纯化后的包涵体进行复性.采用流式细胞术鉴定复性产物与靶细胞的结合活性,结果表明免疫毒素CEA/PE38/KDEL具有与靶细胞特异性结合的活性.以MTT法检测免疫毒素对肿瘤细胞的体外杀伤活性,结果表明该免疫毒素对SW1116和CNE-2细胞具有特异性杀伤活性.证明了经包涵体复性的抗CEA免疫毒素CEA/PE38/KDEL对表达CEA抗原的肿瘤细胞具有良好的结合和杀伤活性.
以抗癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)單鏈抗體與假單胞菌外毒素(Pseudomonas exotoxin A,PEA)的截短和脩飾形式PE38/KDEL構建重組免疫毒素CEA/PE38/KDEL,併在大腸桿菌菌株BL21(DE3)-star中錶達.採用鎳離子螯閤層析法純化變性的包涵體樣品,併用連續梯度透析的方法對純化後的包涵體進行複性.採用流式細胞術鑒定複性產物與靶細胞的結閤活性,結果錶明免疫毒素CEA/PE38/KDEL具有與靶細胞特異性結閤的活性.以MTT法檢測免疫毒素對腫瘤細胞的體外殺傷活性,結果錶明該免疫毒素對SW1116和CNE-2細胞具有特異性殺傷活性.證明瞭經包涵體複性的抗CEA免疫毒素CEA/PE38/KDEL對錶達CEA抗原的腫瘤細胞具有良好的結閤和殺傷活性.
이항암배항원(Carcinoembryonic antigen,CEA)단련항체여가단포균외독소(Pseudomonas exotoxin A,PEA)적절단화수식형식PE38/KDEL구건중조면역독소CEA/PE38/KDEL,병재대장간균균주BL21(DE3)-star중표체.채용얼리자오합층석법순화변성적포함체양품,병용련속제도투석적방법대순화후적포함체진행복성.채용류식세포술감정복성산물여파세포적결합활성,결과표명면역독소CEA/PE38/KDEL구유여파세포특이성결합적활성.이MTT법검측면역독소대종류세포적체외살상활성,결과표명해면역독소대SW1116화CNE-2세포구유특이성살상활성.증명료경포함체복성적항CEA면역독소CEA/PE38/KDEL대표체CEA항원적종류세포구유량호적결합화살상활성.
