CAJ | 학술논문

目的用鸡偏嗜性密码子替换H5亚型禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的保护性免疫原HA基因的密码子,优化和构建了基因optiHA5,以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果.方法利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的HA基因(optiHA5),并将其插入表达载体pCI构建了DNA疫苗质粒pCIoptiHA5;将pCIoptiHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA5及pCIHA5分别以100 μg和10 μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100 LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果间接免疫荧光法和Western-blot分析表明基因optiHA5表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100 μg pCIoptiHA5可形成75%的免疫保护,100 μg pCIHA5可形成50%的免疫保护;10 μg pCIoptiHA5可形成对免疫鸡75%的部分免疫保护,而10 μg pCIHA5则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5.结论试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,提高免疫原性,增强免疫保护效果.
목적용계편기성밀마자체환H5아형금류감병독A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]적보호성면역원HA기인적밀마자,우화화구건료기인optiHA5,이제고H5아형금류감DNA역묘적표체수평화면역보호효과.방법이용과핵감산합성、중첩연신PCR법급한제매절법구건료밀마자우화적HA기인(optiHA5),병장기삽입표체재체pCI구건료DNA역묘질립pCIoptiHA5;장pCIoptiHA5화표체GD/1/96(H5N1)HA기인적질립pCIHA5통과간접면역형광법화Western-blot분석검측전염293T세포후순시표체적HA항원단백;수지장pCIoptiHA5급pCIHA5분별이100 μg화10 μg제량일차면역3주령SPF계,4주후용100 LD50적HPAIV GD/1/96(H5N1)비강도경진행공격.결과간접면역형광법화Western-blot분석표명기인optiHA5표체수평현저고우야생형HA기인;면역SPF계후,100 μg pCIoptiHA5가형성75%적면역보호,100 μg pCIHA5가형성50%적면역보호;10 μg pCIoptiHA5가형성대면역계75%적부분면역보호,이10 μg pCIHA5칙기본불능형성면역보호;pCIoptiHA5유도적HI항체수평원원고우pCIHA5.결론시험결과표명,HA기인밀마자적우화가현저제고HA기인체외표체수평화H5아형금류감DNA역묘유도적보호성항체면역반응수평,제고면역원성,증강면역보호효과.