天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2005年
7期
437-440
,共4页
尹冰楠%李冬田%李秋香%佟惠春%李光明
尹冰楠%李鼕田%李鞦香%佟惠春%李光明
윤빙남%리동전%리추향%동혜춘%리광명
胸苷激酶%胞嘧啶脱氨酶%腺病毒科%肿瘤%基因治疗
胸苷激酶%胞嘧啶脫氨酶%腺病毒科%腫瘤%基因治療
흉감격매%포밀정탈안매%선병독과%종류%기인치료
目的:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒AdEasy系统加以改进,为制备具有更高抗肿瘤疗效的生物治疗制剂奠定基础.方法:将自杀基因CD和HSV-TK插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,PmeⅠ酶切后,用酚:氯仿抽提、乙醇沉淀或切胶回收纯化;分别采用电穿孔转化法和化学转化法将线性穿梭质粒(pAdTrackCMV-CDglyTK)与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内实现同源重组;将重组腺病毒质粒rpAdEasyGFP-CDglyTK以脂质体介导至293细胞中进行包装、扩增.结果:采用切胶回收化学转化法获得阳性重组率最高(100%).经PCR、酶切以及测序等方法鉴定,证实融合自杀基因已成功插入腺病毒中.结论:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒的方法进行了改进,在降低实验成本的同时获得了较原法更高的阳性重组率,并成功构建了复制缺陷性重组腺病毒rAd-CDglyTK.
目的:對細菌內同源重組法構建重組腺病毒AdEasy繫統加以改進,為製備具有更高抗腫瘤療效的生物治療製劑奠定基礎.方法:將自殺基因CD和HSV-TK插入穿梭質粒pAdTrack-CMV中,PmeⅠ酶切後,用酚:氯倣抽提、乙醇沉澱或切膠迴收純化;分彆採用電穿孔轉化法和化學轉化法將線性穿梭質粒(pAdTrackCMV-CDglyTK)與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1在細菌內實現同源重組;將重組腺病毒質粒rpAdEasyGFP-CDglyTK以脂質體介導至293細胞中進行包裝、擴增.結果:採用切膠迴收化學轉化法穫得暘性重組率最高(100%).經PCR、酶切以及測序等方法鑒定,證實融閤自殺基因已成功插入腺病毒中.結論:對細菌內同源重組法構建重組腺病毒的方法進行瞭改進,在降低實驗成本的同時穫得瞭較原法更高的暘性重組率,併成功構建瞭複製缺陷性重組腺病毒rAd-CDglyTK.
목적:대세균내동원중조법구건중조선병독AdEasy계통가이개진,위제비구유경고항종류료효적생물치료제제전정기출.방법:장자살기인CD화HSV-TK삽입천사질립pAdTrack-CMV중,PmeⅠ매절후,용분:록방추제、을순침정혹절효회수순화;분별채용전천공전화법화화학전화법장선성천사질립(pAdTrackCMV-CDglyTK)여선병독골가질립pAdEasy-1재세균내실현동원중조;장중조선병독질립rpAdEasyGFP-CDglyTK이지질체개도지293세포중진행포장、확증.결과:채용절효회수화학전화법획득양성중조솔최고(100%).경PCR、매절이급측서등방법감정,증실융합자살기인이성공삽입선병독중.결론:대세균내동원중조법구건중조선병독적방법진행료개진,재강저실험성본적동시획득료교원법경고적양성중조솔,병성공구건료복제결함성중조선병독rAd-CDglyTK.
