科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2006年
8期
936-938,946
,共4页
代忠明%陈苏民%陈南春%杜可军%骆文静%陈景元
代忠明%陳囌民%陳南春%杜可軍%駱文靜%陳景元
대충명%진소민%진남춘%두가군%락문정%진경원
mlrpS%脂多糖应答基因%表达载体%溶核蛋白
mlrpS%脂多糖應答基因%錶達載體%溶覈蛋白
mlrpS%지다당응답기인%표체재체%용핵단백
为构建小鼠mlrpS-cDNA基因原核、真核表达载体,大肠杆菌表达其融合蛋白.采用反转录-聚合酶链反应从经脂多糖刺激的鼠NIH3T3细胞cDNA中,扩增出编码mlrpS的cDNA.用限制性内切酶Kpn Ⅰ and XhoⅠ消化后,插入原核表达载体pTAT中,经酶切鉴定与测序证实后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株.异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生融合蛋白.经Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ酶切回收mlrpS-cDNA,插入pcDNA3.1载体中;pcDNA3.1-mlrpS再经Kpn Ⅰ和ApaⅠ酶切后,插入到pEGFP-c1载体上,构建pEGFP-mlrpS融合的真核表达载体.构建mlrpS表达载体经测序证实,与GenBank登录的序列完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入载体pEGFP及pTAT;SDS-PAGE证实融合蛋白表达成功.说明:成功地构建了mlrpS原核、真核表达载体,成功正确表达了6His/mlrpS融合蛋白.
為構建小鼠mlrpS-cDNA基因原覈、真覈錶達載體,大腸桿菌錶達其融閤蛋白.採用反轉錄-聚閤酶鏈反應從經脂多糖刺激的鼠NIH3T3細胞cDNA中,擴增齣編碼mlrpS的cDNA.用限製性內切酶Kpn Ⅰ and XhoⅠ消化後,插入原覈錶達載體pTAT中,經酶切鑒定與測序證實後,轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株.異丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)誘導產生融閤蛋白.經Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ酶切迴收mlrpS-cDNA,插入pcDNA3.1載體中;pcDNA3.1-mlrpS再經Kpn Ⅰ和ApaⅠ酶切後,插入到pEGFP-c1載體上,構建pEGFP-mlrpS融閤的真覈錶達載體.構建mlrpS錶達載體經測序證實,與GenBank登錄的序列完全一緻;雙酶切鑒定證實,剋隆基因正確插入載體pEGFP及pTAT;SDS-PAGE證實融閤蛋白錶達成功.說明:成功地構建瞭mlrpS原覈、真覈錶達載體,成功正確錶達瞭6His/mlrpS融閤蛋白.
위구건소서mlrpS-cDNA기인원핵、진핵표체재체,대장간균표체기융합단백.채용반전록-취합매련반응종경지다당자격적서NIH3T3세포cDNA중,확증출편마mlrpS적cDNA.용한제성내절매Kpn Ⅰ and XhoⅠ소화후,삽입원핵표체재체pTAT중,경매절감정여측서증실후,전화대장간균BL21(DE3)균주.이병기β-D류대반유당감(IPTG)유도산생융합단백.경Kpn Ⅰ화Xho Ⅰ매절회수mlrpS-cDNA,삽입pcDNA3.1재체중;pcDNA3.1-mlrpS재경Kpn Ⅰ화ApaⅠ매절후,삽입도pEGFP-c1재체상,구건pEGFP-mlrpS융합적진핵표체재체.구건mlrpS표체재체경측서증실,여GenBank등록적서렬완전일치;쌍매절감정증실,극륭기인정학삽입재체pEGFP급pTAT;SDS-PAGE증실융합단백표체성공.설명:성공지구건료mlrpS원핵、진핵표체재체,성공정학표체료6His/mlrpS융합단백.
