癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2007年
11期
1164-1169
,共6页
卢宏达%黄涛%申雯竹%甄燕%孔庆志
盧宏達%黃濤%申雯竹%甄燕%孔慶誌
로굉체%황도%신문죽%견연%공경지
端粒长度%端锚酶%端粒酶催化亚单位%反义寡核苷酸%A549细胞
耑粒長度%耑錨酶%耑粒酶催化亞單位%反義寡覈苷痠%A549細胞
단립장도%단묘매%단립매최화아단위%반의과핵감산%A549세포
背景与目的:端锚酶是真核生物体内的一种重要的功能蛋白,对调节细胞端粒长度及参与细胞衰老和永生化过程起着重要的作用.本研究探讨端锚酶及端粒酶反义寡核苷酸联合作用对人肺腺癌A549细胞端粒相关蛋白表达和翻译的影响,以及对端粒缩短效能和细胞周期的作用.方法:将培养的A549细胞分为空白对照组、端锚酶正义寡核苷酸对照(tankyrase sense oligonucleotide,sTANKS)、端粒酶催化亚单位正义寡核苷酸对照组(human telomerase reverse transcriptase sense oligonucleotide,shTERT)、端锚酶反义寡核苷酸实验组(tankyrase antisense oligonucleotide,asTANKS)、端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸实验组(human telomerase reverse transcriptase antisense oligonucleotide,ashTERT)、端锚酶及端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸联合实验组(asTANKS+ashTERT).分别与不同的正、反义寡核苷酸作用,采用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法观察端粒酶催化亚单位的mRNA表达,ELISAPCR法测定端粒酶活性,Western blot法观察端锚酶活性,Q-FISH法检测各组端粒的平均长度;并通过传代实验观察不同正、反义寡核苷酸对A549细胞传代寿命的影响.结果:ashTERT能明显抑制端粒酶催化亚单位的mRNA表达及蛋白质活性,不影响端锚酶活性;作用48h后细胞平均端粒长度明显缩短[(7.59±0.07)kb];细胞在经过56.92±0.46个倍增时间(population double,PD)连续培养终止.asTANKS不影响端粒酶催化亚单位mRNA表达及蛋白质活性,却能明显抑制端锚酶活性;作用48h后细胞平均端粒长度明显缩短[(7.33±0.09)kb];细胞在经过(53.33±0.57)PD连续培养终止.ashTERT+asTANKS联合作用同时抑制端粒酶和端锚酶.其细胞平均端粒长度缩短更为明显[(3.55±0.08)kb],流式直方图上FITC荧光"左偏"更显著,与ashTERT、asTANKS比较差异有显著性(t=37.33、32.50,P＜0.001);ashTERT+asTANKS组细胞在经(24.53±0.40)PD后培养终止,与ashTERT、asTANKS比较差异也有显著性(t=53.38、43.39,P＜0.001).结论:端锚酶反义寡核苷酸对A549细胞端粒长度的抑制有别于端粒酶途径,它不仅能通过影响端锚酶活性,缩短A549细胞端粒的平均长度,而达到缩短肿瘤细胞生存寿命的目的;而且可与端粒酶抑制剂产生协同作用,明显缩短肿瘤细胞的生存周期,可能成为抗癌作用的新靶点.
揹景與目的:耑錨酶是真覈生物體內的一種重要的功能蛋白,對調節細胞耑粒長度及參與細胞衰老和永生化過程起著重要的作用.本研究探討耑錨酶及耑粒酶反義寡覈苷痠聯閤作用對人肺腺癌A549細胞耑粒相關蛋白錶達和翻譯的影響,以及對耑粒縮短效能和細胞週期的作用.方法:將培養的A549細胞分為空白對照組、耑錨酶正義寡覈苷痠對照(tankyrase sense oligonucleotide,sTANKS)、耑粒酶催化亞單位正義寡覈苷痠對照組(human telomerase reverse transcriptase sense oligonucleotide,shTERT)、耑錨酶反義寡覈苷痠實驗組(tankyrase antisense oligonucleotide,asTANKS)、耑粒酶催化亞單位反義寡覈苷痠實驗組(human telomerase reverse transcriptase antisense oligonucleotide,ashTERT)、耑錨酶及耑粒酶催化亞單位反義寡覈苷痠聯閤實驗組(asTANKS+ashTERT).分彆與不同的正、反義寡覈苷痠作用,採用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法觀察耑粒酶催化亞單位的mRNA錶達,ELISAPCR法測定耑粒酶活性,Western blot法觀察耑錨酶活性,Q-FISH法檢測各組耑粒的平均長度;併通過傳代實驗觀察不同正、反義寡覈苷痠對A549細胞傳代壽命的影響.結果:ashTERT能明顯抑製耑粒酶催化亞單位的mRNA錶達及蛋白質活性,不影響耑錨酶活性;作用48h後細胞平均耑粒長度明顯縮短[(7.59±0.07)kb];細胞在經過56.92±0.46箇倍增時間(population double,PD)連續培養終止.asTANKS不影響耑粒酶催化亞單位mRNA錶達及蛋白質活性,卻能明顯抑製耑錨酶活性;作用48h後細胞平均耑粒長度明顯縮短[(7.33±0.09)kb];細胞在經過(53.33±0.57)PD連續培養終止.ashTERT+asTANKS聯閤作用同時抑製耑粒酶和耑錨酶.其細胞平均耑粒長度縮短更為明顯[(3.55±0.08)kb],流式直方圖上FITC熒光"左偏"更顯著,與ashTERT、asTANKS比較差異有顯著性(t=37.33、32.50,P＜0.001);ashTERT+asTANKS組細胞在經(24.53±0.40)PD後培養終止,與ashTERT、asTANKS比較差異也有顯著性(t=53.38、43.39,P＜0.001).結論:耑錨酶反義寡覈苷痠對A549細胞耑粒長度的抑製有彆于耑粒酶途徑,它不僅能通過影響耑錨酶活性,縮短A549細胞耑粒的平均長度,而達到縮短腫瘤細胞生存壽命的目的;而且可與耑粒酶抑製劑產生協同作用,明顯縮短腫瘤細胞的生存週期,可能成為抗癌作用的新靶點.
배경여목적:단묘매시진핵생물체내적일충중요적공능단백,대조절세포단립장도급삼여세포쇠로화영생화과정기착중요적작용.본연구탐토단묘매급단립매반의과핵감산연합작용대인폐선암A549세포단립상관단백표체화번역적영향,이급대단립축단효능화세포주기적작용.방법:장배양적A549세포분위공백대조조、단묘매정의과핵감산대조(tankyrase sense oligonucleotide,sTANKS)、단립매최화아단위정의과핵감산대조조(human telomerase reverse transcriptase sense oligonucleotide,shTERT)、단묘매반의과핵감산실험조(tankyrase antisense oligonucleotide,asTANKS)、단립매최화아단위반의과핵감산실험조(human telomerase reverse transcriptase antisense oligonucleotide,ashTERT)、단묘매급단립매최화아단위반의과핵감산연합실험조(asTANKS+ashTERT).분별여불동적정、반의과핵감산작용,채용RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)법관찰단립매최화아단위적mRNA표체,ELISAPCR법측정단립매활성,Western blot법관찰단묘매활성,Q-FISH법검측각조단립적평균장도;병통과전대실험관찰불동정、반의과핵감산대A549세포전대수명적영향.결과:ashTERT능명현억제단립매최화아단위적mRNA표체급단백질활성,불영향단묘매활성;작용48h후세포평균단립장도명현축단[(7.59±0.07)kb];세포재경과56.92±0.46개배증시간(population double,PD)련속배양종지.asTANKS불영향단립매최화아단위mRNA표체급단백질활성,각능명현억제단묘매활성;작용48h후세포평균단립장도명현축단[(7.33±0.09)kb];세포재경과(53.33±0.57)PD련속배양종지.ashTERT+asTANKS연합작용동시억제단립매화단묘매.기세포평균단립장도축단경위명현[(3.55±0.08)kb],류식직방도상FITC형광"좌편"경현저,여ashTERT、asTANKS비교차이유현저성(t=37.33、32.50,P＜0.001);ashTERT+asTANKS조세포재경(24.53±0.40)PD후배양종지,여ashTERT、asTANKS비교차이야유현저성(t=53.38、43.39,P＜0.001).결론:단묘매반의과핵감산대A549세포단립장도적억제유별우단립매도경,타불부능통과영향단묘매활성,축단A549세포단립적평균장도,이체도축단종류세포생존수명적목적;이차가여단립매억제제산생협동작용,명현축단종류세포적생존주기,가능성위항암작용적신파점.
