生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
9期
1649-1652
,共4页
王志方%张学军%王博%周小云%艾秀莲
王誌方%張學軍%王博%週小雲%艾秀蓮
왕지방%장학군%왕박%주소운%애수련
磷脂酰乙醇胺结合蛋白%原核表达%低温诱导%雪莲
燐脂酰乙醇胺結閤蛋白%原覈錶達%低溫誘導%雪蓮
린지선을순알결합단백%원핵표체%저온유도%설련
本实验旨在构建雪莲类PEBP基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化类PEBP基因所编码的蛋白,为进一步研究奠定基础.将雪莲类PEBP基因开放阅读框序列克隆到原核表达载体pET30(+)上,转化感受态表达菌株BL21(DE3),低浓度IPTG低温诱导融合蛋白的表达,纯化产物,Western blotting鉴定目的蛋白.IFTG低诱导PEBP,经SDS-PAGE分析,其相对分子量约为28 kD,与预期相符,表达量约占菌体蛋白的26.8%,并且通过亲和层析纯化了重组融合蛋白,Western blotting鉴定为阳性.成功构建了原核表达载体pET-PEBP,获得了高效表达产物,并为进一步研究雪莲类PEBP基因的抗冻功能打下基础.
本實驗旨在構建雪蓮類PEBP基因原覈錶達載體,在大腸桿菌中錶達併純化類PEBP基因所編碼的蛋白,為進一步研究奠定基礎.將雪蓮類PEBP基因開放閱讀框序列剋隆到原覈錶達載體pET30(+)上,轉化感受態錶達菌株BL21(DE3),低濃度IPTG低溫誘導融閤蛋白的錶達,純化產物,Western blotting鑒定目的蛋白.IFTG低誘導PEBP,經SDS-PAGE分析,其相對分子量約為28 kD,與預期相符,錶達量約佔菌體蛋白的26.8%,併且通過親和層析純化瞭重組融閤蛋白,Western blotting鑒定為暘性.成功構建瞭原覈錶達載體pET-PEBP,穫得瞭高效錶達產物,併為進一步研究雪蓮類PEBP基因的抗凍功能打下基礎.
본실험지재구건설련류PEBP기인원핵표체재체,재대장간균중표체병순화류PEBP기인소편마적단백,위진일보연구전정기출.장설련류PEBP기인개방열독광서렬극륭도원핵표체재체pET30(+)상,전화감수태표체균주BL21(DE3),저농도IPTG저온유도융합단백적표체,순화산물,Western blotting감정목적단백.IFTG저유도PEBP,경SDS-PAGE분석,기상대분자량약위28 kD,여예기상부,표체량약점균체단백적26.8%,병차통과친화층석순화료중조융합단백,Western blotting감정위양성.성공구건료원핵표체재체pET-PEBP,획득료고효표체산물,병위진일보연구설련류PEBP기인적항동공능타하기출.
