广西农业科学
廣西農業科學
엄서농업과학
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
6期
598-601
,共4页
黄百花%刘文娟%李志勇%谭春萍%周松峰%谭颖翌%罗佳%陆芹章
黃百花%劉文娟%李誌勇%譚春萍%週鬆峰%譚穎翌%囉佳%陸芹章
황백화%류문연%리지용%담춘평%주송봉%담영익%라가%륙근장
猪D型产毒素多杀巴氏杆菌%毒素基因%分段%原核表达
豬D型產毒素多殺巴氏桿菌%毒素基因%分段%原覈錶達
저D형산독소다살파씨간균%독소기인%분단%원핵표체
根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达.经SDS-PAGE和Western blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达.动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性.通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性.
根據GenBank已髮錶的產毒素多殺性巴氏桿菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)設計1對引物,從豬源D型T+Pm中擴增齣toxA基因片段(3858 bp),再根據toxA基因序列設計3對引物,分彆擴增齣ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3箇分段基因,將其剋隆至原覈錶達載體pET32a,轉入大腸桿菌BL21中進行融閤錶達.經SDS-PAGE和Western blotting檢測分析,髮現ZQ、HM基因的錶達產物以包涵體形式存在,大小分彆為75、50 kDa,ZH基因不錶達.動物試驗結果錶明,HM重組蛋白具有良好的免疫原性、反應原性及一定的生物學活性,而ZQ重組蛋白沒有免疫原性、反應原性及生物學活性.通過間接ELISA的方法檢測抗毒素的暘性豬血清,結果錶明,HM重組蛋白較天然蛋白具有更高的特異性.
근거GenBank이발표적산독소다살성파씨간균(T+Pm)toxA기인서렬(AF240778)설계1대인물,종저원D형T+Pm중확증출toxA기인편단(3858 bp),재근거toxA기인서렬설계3대인물,분별확증출ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3개분단기인,장기극륭지원핵표체재체pET32a,전입대장간균BL21중진행융합표체.경SDS-PAGE화Western blotting검측분석,발현ZQ、HM기인적표체산물이포함체형식존재,대소분별위75、50 kDa,ZH기인불표체.동물시험결과표명,HM중조단백구유량호적면역원성、반응원성급일정적생물학활성,이ZQ중조단백몰유면역원성、반응원성급생물학활성.통과간접ELISA적방법검측항독소적양성저혈청,결과표명,HM중조단백교천연단백구유경고적특이성.
