中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2011年
4期
823-828
,共6页
揭伟%申志华%王晓燕%况东%王国平%敖启林
揭偉%申誌華%王曉燕%況東%王國平%敖啟林
게위%신지화%왕효연%황동%왕국평%오계림
心肌素%载体构建%慢病毒%血管平滑肌细胞%细胞分化
心肌素%載體構建%慢病毒%血管平滑肌細胞%細胞分化
심기소%재체구건%만병독%혈관평활기세포%세포분화
目的:构建大鼠心肌素(myocardin)慢病毒RNA干扰(RNAi)重组质粒,分析该RNAi质粒的干扰效果及其对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响.方法:设计并合成3对针对大鼠myocardin的shRNA片段,退火后将双链oligo-DNA克隆入慢病毒质粒载体pGCSIL- GFP获得重组干扰质粒pGCSIL- GFP - shMyocd.以pEGFP - N1 / X124G表达载体构建含Flag标签的myocardin表达质粒pEGFP - N1- Myocd.将重组干扰质粒和过表达质粒共转染293T细胞,Western blotting分析Flag标签蛋白的表达,筛选出干扰效率最好的干扰质粒并大量扩增.干扰质粒转染大鼠主动脉VSMCs,RT - PCR和Western blotting检测myocardin及分化标志物SM22α的表达.结果:成功构建大鼠myocardin的慢病毒干扰质粒pGCSIL- GFP - shMyocd和过表达质粒pEGFP - N1 - Myocd.上述2种质粒共转染293T细胞后,1号干扰质粒转染组Flag标签蛋白表达下降最显著.将1号质粒进行大包装,获得滴度为1×1012 TU/L的慢病毒颗粒,该病毒转染VSMCs后,myocardin表达明显下调并伴随分化标志物SM22α表达的显著下降.结论:成功构建大鼠myocardin慢病毒重组干扰质粒pGCSIL- GFP - shMyocd;抑制基因myocardin表达后伴随VSMCs分化的表达下降,提示myocardin在VSMCs分化过程中的重要性.pGCSIL- GFP - shMyocd重组质粒的成功构建为后续研究特定病理条件下(如动脉粥样硬化)VSMCs表型转变的分子机制奠定了基础.
目的:構建大鼠心肌素(myocardin)慢病毒RNA榦擾(RNAi)重組質粒,分析該RNAi質粒的榦擾效果及其對血管平滑肌細胞(VSMCs)分化的影響.方法:設計併閤成3對針對大鼠myocardin的shRNA片段,退火後將雙鏈oligo-DNA剋隆入慢病毒質粒載體pGCSIL- GFP穫得重組榦擾質粒pGCSIL- GFP - shMyocd.以pEGFP - N1 / X124G錶達載體構建含Flag標籤的myocardin錶達質粒pEGFP - N1- Myocd.將重組榦擾質粒和過錶達質粒共轉染293T細胞,Western blotting分析Flag標籤蛋白的錶達,篩選齣榦擾效率最好的榦擾質粒併大量擴增.榦擾質粒轉染大鼠主動脈VSMCs,RT - PCR和Western blotting檢測myocardin及分化標誌物SM22α的錶達.結果:成功構建大鼠myocardin的慢病毒榦擾質粒pGCSIL- GFP - shMyocd和過錶達質粒pEGFP - N1 - Myocd.上述2種質粒共轉染293T細胞後,1號榦擾質粒轉染組Flag標籤蛋白錶達下降最顯著.將1號質粒進行大包裝,穫得滴度為1×1012 TU/L的慢病毒顆粒,該病毒轉染VSMCs後,myocardin錶達明顯下調併伴隨分化標誌物SM22α錶達的顯著下降.結論:成功構建大鼠myocardin慢病毒重組榦擾質粒pGCSIL- GFP - shMyocd;抑製基因myocardin錶達後伴隨VSMCs分化的錶達下降,提示myocardin在VSMCs分化過程中的重要性.pGCSIL- GFP - shMyocd重組質粒的成功構建為後續研究特定病理條件下(如動脈粥樣硬化)VSMCs錶型轉變的分子機製奠定瞭基礎.
목적:구건대서심기소(myocardin)만병독RNA간우(RNAi)중조질립,분석해RNAi질립적간우효과급기대혈관평활기세포(VSMCs)분화적영향.방법:설계병합성3대침대대서myocardin적shRNA편단,퇴화후장쌍련oligo-DNA극륭입만병독질립재체pGCSIL- GFP획득중조간우질립pGCSIL- GFP - shMyocd.이pEGFP - N1 / X124G표체재체구건함Flag표첨적myocardin표체질립pEGFP - N1- Myocd.장중조간우질립화과표체질립공전염293T세포,Western blotting분석Flag표첨단백적표체,사선출간우효솔최호적간우질립병대량확증.간우질립전염대서주동맥VSMCs,RT - PCR화Western blotting검측myocardin급분화표지물SM22α적표체.결과:성공구건대서myocardin적만병독간우질립pGCSIL- GFP - shMyocd화과표체질립pEGFP - N1 - Myocd.상술2충질립공전염293T세포후,1호간우질립전염조Flag표첨단백표체하강최현저.장1호질립진행대포장,획득적도위1×1012 TU/L적만병독과립,해병독전염VSMCs후,myocardin표체명현하조병반수분화표지물SM22α표체적현저하강.결론:성공구건대서myocardin만병독중조간우질립pGCSIL- GFP - shMyocd;억제기인myocardin표체후반수VSMCs분화적표체하강,제시myocardin재VSMCs분화과정중적중요성.pGCSIL- GFP - shMyocd중조질립적성공구건위후속연구특정병리조건하(여동맥죽양경화)VSMCs표형전변적분자궤제전정료기출.
