广东海洋大学学报
廣東海洋大學學報
엄동해양대학학보
JOURNAL OF GUANGDONG OCEAN UNIVERSITY
2012年
1期
11-16
,共6页
张雪利%鲁义善%谢吉国%简纪常%吴灶和
張雪利%魯義善%謝吉國%簡紀常%吳竈和
장설리%로의선%사길국%간기상%오조화
红笛鲷%rag1基因%原核表达%表达条件%优化%纯化%Western blot分析
紅笛鯛%rag1基因%原覈錶達%錶達條件%優化%純化%Western blot分析
홍적조%rag1기인%원핵표체%표체조건%우화%순화%Western blot분석
克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)RAGI蛋白(recombination activating proteinl)活性核心区的基因序列,并与pET-28a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-28a-RAG1,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG进行诱导表达.为提高融合蛋白的表达效率,运用传统的实验方法对诱导条件进行优化.SDS-PAGE分析表明,在37℃条件下,利用0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,RAG1重组融合蛋白的表达量最大,相对分子质量与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式高效表达,利用His Trap HP亲和柱使其得到进一步纯化；Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明表达蛋白为目的蛋白.
剋隆編碼紅笛鯛(Lutjanus sanguineus)RAGI蛋白(recombination activating proteinl)活性覈心區的基因序列,併與pET-28a(+)載體連接,構建原覈錶達載體pET-28a-RAG1,將其轉入大腸桿菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG進行誘導錶達.為提高融閤蛋白的錶達效率,運用傳統的實驗方法對誘導條件進行優化.SDS-PAGE分析錶明,在37℃條件下,利用0.1 mmol/L IPTG誘導8h後,RAG1重組融閤蛋白的錶達量最大,相對分子質量與預測值相符,該蛋白主要以包涵體形式高效錶達,利用His Trap HP親和柱使其得到進一步純化；Western blot分析顯示,該融閤蛋白可與鼠抗His-tag單剋隆抗體髮生特異性結閤,說明錶達蛋白為目的蛋白.
극륭편마홍적조(Lutjanus sanguineus)RAGI단백(recombination activating proteinl)활성핵심구적기인서렬,병여pET-28a(+)재체련접,구건원핵표체재체pET-28a-RAG1,장기전입대장간균BL21(DE3)균주,이용IPTG진행유도표체.위제고융합단백적표체효솔,운용전통적실험방법대유도조건진행우화.SDS-PAGE분석표명,재37℃조건하,이용0.1 mmol/L IPTG유도8h후,RAG1중조융합단백적표체량최대,상대분자질량여예측치상부,해단백주요이포함체형식고효표체,이용His Trap HP친화주사기득도진일보순화；Western blot분석현시,해융합단백가여서항His-tag단극륭항체발생특이성결합,설명표체단백위목적단백.
