北京医学
北京醫學
북경의학
BEIJING MEDICAL JOURNAL
2012年
9期
828-830,封二
,共4页
徐树莹%乔录新%丁渭%陈德喜
徐樹瑩%喬錄新%丁渭%陳德喜
서수형%교록신%정위%진덕희
樱桃红色荧光蛋白%微管相关蛋白1轻链3%自噬%表达载体
櫻桃紅色熒光蛋白%微管相關蛋白1輕鏈3%自噬%錶達載體
앵도홍색형광단백%미관상관단백1경련3%자서%표체재체
目的 构建带有樱桃红色荧光蛋白(cherry fluorescent protein,CFP)标签的微管相关蛋白1轻链3(LC3)自噬真核表达载体,并进行初步表达鉴定.方法 采用PCR方法,从质粒载体pCMV-GFP-LC3为模板扩增LC3片段,通过T4 DNA连接酶将纯化后的PCR产物LC3与经过ApaI和BamHI双酶切的pm-cherry-c1载体连接,命名为PM-CFP-LC3.该载体经酶切及测序验证后,在fugene6转染试剂介导下转染293细胞,通过荧光显微镜观察CFP在细胞内的分布来观察LC3表达情况.结果 带有CFP标签的LC3表达载体构建成功,在荧光显微镜下可观察到转染细胞中樱桃红色荧光以及细胞自噬现象.结论 成功构建了带有CFP标签LC3的重组质粒并成功表达,为深入研究细胞的自噬奠定了实验基础.
目的 構建帶有櫻桃紅色熒光蛋白(cherry fluorescent protein,CFP)標籤的微管相關蛋白1輕鏈3(LC3)自噬真覈錶達載體,併進行初步錶達鑒定.方法 採用PCR方法,從質粒載體pCMV-GFP-LC3為模闆擴增LC3片段,通過T4 DNA連接酶將純化後的PCR產物LC3與經過ApaI和BamHI雙酶切的pm-cherry-c1載體連接,命名為PM-CFP-LC3.該載體經酶切及測序驗證後,在fugene6轉染試劑介導下轉染293細胞,通過熒光顯微鏡觀察CFP在細胞內的分佈來觀察LC3錶達情況.結果 帶有CFP標籤的LC3錶達載體構建成功,在熒光顯微鏡下可觀察到轉染細胞中櫻桃紅色熒光以及細胞自噬現象.結論 成功構建瞭帶有CFP標籤LC3的重組質粒併成功錶達,為深入研究細胞的自噬奠定瞭實驗基礎.
목적 구건대유앵도홍색형광단백(cherry fluorescent protein,CFP)표첨적미관상관단백1경련3(LC3)자서진핵표체재체,병진행초보표체감정.방법 채용PCR방법,종질립재체pCMV-GFP-LC3위모판확증LC3편단,통과T4 DNA련접매장순화후적PCR산물LC3여경과ApaI화BamHI쌍매절적pm-cherry-c1재체련접,명명위PM-CFP-LC3.해재체경매절급측서험증후,재fugene6전염시제개도하전염293세포,통과형광현미경관찰CFP재세포내적분포래관찰LC3표체정황.결과 대유CFP표첨적LC3표체재체구건성공,재형광현미경하가관찰도전염세포중앵도홍색형광이급세포자서현상.결론 성공구건료대유CFP표첨LC3적중조질립병성공표체,위심입연구세포적자서전정료실험기출.
