CAJ | 학술논문

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索.方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白.应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位.结果 (1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5 kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆.序列分析表明:该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合.结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子.Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控.这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能.
목적사선여취성X지력저하단백(FMRP)상호작용적단백,위FMRP생리공능적천석제공신선색.방법이5월령인배해마mRNA위모판제비cDNA,중조우DNA격활결구역재체pGAD10,구건효모쌍잡교문고,종중사선여FMRP상호작용적단백.응용효모쌍잡교체계대FMRP적상호작용구역진행정위.결과 (1)소구건적5월령인배해마cDNA효모쌍잡교문고함1×106극륭,삽입편단평균장도약1.5 kb,유효극륭90%;(2)재해문고중사선도일개여FMRP상호작용적양성극륭.서렬분석표명:해극륭위인적핵감산이린산격매아기B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2여결소외현자12、14-17적FMRP이구체,이급함FMRP외현자1-12적극륭상호작용,이여FMRP외현자1-6、외현자2-7불능직접결합.결론인Nm23-H2재효모세포내능여FMRP결합,기상호작용구역정위우FMRP적전1-11개외현자.Nm23-H2구반식조공인자특성,FMRP여Nm23-H2적상호작용제시FMRP삼여기인표체조공.저일발현유조우진일보연구FMRP재세포핵내적생물학공능.