p38L12-TAT融合肽对山梨糖醇引起的ECV304细胞ATF2磷酸化的抑制作用
p38L12-TAT융합태대산리당순인기적ECV304세포ATF2린산화적억제작용
Inhibition of ATF2 Phosphorylation by p38L12-TAT Fusion Peptide in ECV304 Cell Stimulated with Sorbitol
  • 万方数据
    中国生物化学与分子生物学报 중국생물화학여분자생물학보
    CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
    2006年 5期 402-408 ,共7页

    郭爱华%刘志锋%李海玉%唐靖%李志杰%刘亚伟%龚小卫%刘靖华%邓鹏%姜勇

    곽애화%류지봉%리해옥%당정%리지걸%류아위%공소위%류정화%산붕%강용

    Ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白%丝裂原活化蛋白%Loop 12%细胞转导系统 Ⅰ型人免疫缺陷病毒轉錄激活蛋白%絲裂原活化蛋白%Loop 12%細胞轉導繫統
    Ⅰ형인면역결함병독전록격활단백%사렬원활화단백%Loop 12%세포전도계통
    构建p38 Loop-12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其"T-X-Y"双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TAT-EGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET14b-Gis-TATEGFP),经酶切、测序鉴定正确后,将重组质粒转化原核表达菌,诱导表达纯化融合蛋白;将融合蛋白加入ECV304细胞后于荧光显微镜下观察并行Western印迹分析,检测融合蛋白的细胞内转导活性;通过检测内源性ATF2磷酸化水平,鉴定高渗刺激下p38L12对内源性p38活性的影响.成功构建了p38L12和p38L12(AF)片段与TAT的融合表达载体,并获得相应的融合蛋白.在ECV304细胞中可见导入的HTE-p38L12和HTE-p38L12(AF)融合蛋白具有较高的细胞内转导活性和转导效率,并可竞争性抑制高渗刺激对内源性p38的活化.基于HIV-1 TAT细胞转导系统证实p38L12可竞争性抑制高渗刺激诱导的内源性p38对ATF2的活化,从而发挥对p38激活特异性抑制的功能.
    구건p38 Loop-12(L12)적TAT융합표체재체,순화원핵표체적p38L12융합단백병감정기재진핵세포내적공능.이용PCR방법분별확증출p38L12급기"T-X-Y"쌍린산화위점적AF돌변체p38L12(AF)편단,극륭입His표기적TAT-EGFP융합단백원핵표체재체pHTE(pET14b-Gis-TATEGFP),경매절、측서감정정학후,장중조질립전화원핵표체균,유도표체순화융합단백;장융합단백가입ECV304세포후우형광현미경하관찰병행Western인적분석,검측융합단백적세포내전도활성;통과검측내원성ATF2린산화수평,감정고삼자격하p38L12대내원성p38활성적영향.성공구건료p38L12화p38L12(AF)편단여TAT적융합표체재체,병획득상응적융합단백.재ECV304세포중가견도입적HTE-p38L12화HTE-p38L12(AF)융합단백구유교고적세포내전도활성화전도효솔,병가경쟁성억제고삼자격대내원성p38적활화.기우HIV-1 TAT세포전도계통증실p38L12가경쟁성억제고삼자격유도적내원성p38대ATF2적활화,종이발휘대p38격활특이성억제적공능.
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