CAJ | 학술논문

通过半化学合成方法获得具有大肠杆菌密码子偏爱性的人α-防御素(Human α-defensin或human neutrophil peptide,HNP)HNP-2基因.将其克隆到pET-32a(+)表达载体,构建了重组表达质粒pET-32a(+)/HNP-2.分别转化大肠杆菌BL21(DE3),ER2566以及Origami B(DE3)宿主菌,经过表达条件的优化,结果在大肠杆菌Origami B(DE3)宿主菌中得到了HNP-2基因高效率可溶性的表达,融合蛋白表达量占细菌总蛋白的60%以上.为避免表达产物水解,得到更稳定的人α-防御素,尝试以环化形式和酰胺化形式表达人α-防御素.为得到环化形式的表达,采用intein作为工具,利用其可剪接extein的特点,将其N端区域和C端区域分别融合到HNP-2的C端和N端,其两端的intein片段可将其拼接成环肽.以此为基础构建了环化表达质粒,并对表达条件进行了探索.本文采用了一种新的酰胺化方法,即将intein与HNP-2融合表达,intein对目的短肽进行酰胺化修饰.图6表1参16
통과반화학합성방법획득구유대장간균밀마자편애성적인α-방어소(Human α-defensin혹human neutrophil peptide,HNP)HNP-2기인.장기극륭도pET-32a(+)표체재체,구건료중조표체질립pET-32a(+)/HNP-2.분별전화대장간균BL21(DE3),ER2566이급Origami B(DE3)숙주균,경과표체조건적우화,결과재대장간균Origami B(DE3)숙주균중득도료HNP-2기인고효솔가용성적표체,융합단백표체량점세균총단백적60%이상.위피면표체산물수해,득도경은정적인α-방어소,상시이배화형식화선알화형식표체인α-방어소.위득도배화형식적표체,채용intein작위공구,이용기가전접extein적특점,장기N단구역화C단구역분별융합도HNP-2적C단화N단,기량단적intein편단가장기병접성배태.이차위기출구건료배화표체질립,병대표체조건진행료탐색.본문채용료일충신적선알화방법,즉장intein여HNP-2융합표체,intein대목적단태진행선알화수식.도6표1삼16