中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
6期
1-6
,共6页
张宝中%安小平%张昕%刘大斌%单云竹%周育森%童贻刚
張寶中%安小平%張昕%劉大斌%單雲竹%週育森%童貽剛
장보중%안소평%장흔%류대빈%단운죽%주육삼%동이강
分泌型IgA%基因组DNA剪接%重叠延伸聚合酶链式反应
分泌型IgA%基因組DNA剪接%重疊延伸聚閤酶鏈式反應
분비형IgA%기인조DNA전접%중첩연신취합매련식반응
目的:克隆分泌型IgA(SIgA)相关基因-J链基因(IgJ)、多聚免疫球蛋白受体基因(pIgR)和IgA重链恒定区基因(IGHA),为进一步构建SIgA真核表达质粒奠定基础.方法:采用"基因组DNA剪接"技术,根据已发表的IgJ、pIgR和IGHA的核苷酸序列,通过计算机软件分别设计各个基因片段外显子的优化引物,从人外周血基因组DNA中直接扩增各基因的外显子序列;然后人工设计融合相邻外显子的融合引物,采用重叠PCR技术,把各基因片段的外显子串联起来形成全长编码序列.完成基因组DNA的体外剪接.扩增的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T Easy Vector中,通过DNA测序对阳性克隆进行分析鉴定.结果:PCR扩增的IgJ、pIgR和IGHA基因与预期大小一致;测序结果表明实验获得的上述基因与GenBank中的目标基因序列完全一致.结论:通过基因组:DNA剪接技术成功克隆人类SIgA 3个相关基因,提示此技术是合成多外显子cDNA的有效手段.
目的:剋隆分泌型IgA(SIgA)相關基因-J鏈基因(IgJ)、多聚免疫毬蛋白受體基因(pIgR)和IgA重鏈恆定區基因(IGHA),為進一步構建SIgA真覈錶達質粒奠定基礎.方法:採用"基因組DNA剪接"技術,根據已髮錶的IgJ、pIgR和IGHA的覈苷痠序列,通過計算機軟件分彆設計各箇基因片段外顯子的優化引物,從人外週血基因組DNA中直接擴增各基因的外顯子序列;然後人工設計融閤相鄰外顯子的融閤引物,採用重疊PCR技術,把各基因片段的外顯子串聯起來形成全長編碼序列.完成基因組DNA的體外剪接.擴增的PCR產物純化後剋隆到pGEM-T Easy Vector中,通過DNA測序對暘性剋隆進行分析鑒定.結果:PCR擴增的IgJ、pIgR和IGHA基因與預期大小一緻;測序結果錶明實驗穫得的上述基因與GenBank中的目標基因序列完全一緻.結論:通過基因組:DNA剪接技術成功剋隆人類SIgA 3箇相關基因,提示此技術是閤成多外顯子cDNA的有效手段.
목적:극륭분비형IgA(SIgA)상관기인-J련기인(IgJ)、다취면역구단백수체기인(pIgR)화IgA중련항정구기인(IGHA),위진일보구건SIgA진핵표체질립전정기출.방법:채용"기인조DNA전접"기술,근거이발표적IgJ、pIgR화IGHA적핵감산서렬,통과계산궤연건분별설계각개기인편단외현자적우화인물,종인외주혈기인조DNA중직접확증각기인적외현자서렬;연후인공설계융합상린외현자적융합인물,채용중첩PCR기술,파각기인편단적외현자천련기래형성전장편마서렬.완성기인조DNA적체외전접.확증적PCR산물순화후극륭도pGEM-T Easy Vector중,통과DNA측서대양성극륭진행분석감정.결과:PCR확증적IgJ、pIgR화IGHA기인여예기대소일치;측서결과표명실험획득적상술기인여GenBank중적목표기인서렬완전일치.결론:통과기인조:DNA전접기술성공극륭인류SIgA 3개상관기인,제시차기술시합성다외현자cDNA적유효수단.
