南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
9期
2077-2079,2083
,共4页
谢妮%韩艳萍%吴瑾滨%袁建辉
謝妮%韓豔萍%吳瑾濱%袁建輝
사니%한염평%오근빈%원건휘
人巨细胞病毒即刻早期Ⅰ基因%基因表达%RNA干扰%真核载体
人巨細胞病毒即刻早期Ⅰ基因%基因錶達%RNA榦擾%真覈載體
인거세포병독즉각조기Ⅰ기인%기인표체%RNA간우%진핵재체
目的 采用RNA干扰技术研究在体外对人巨细胞病毒即刻早期Ⅰ基因(HCMV-IE1)表达的沉默作用.方法 根据HCMV-IE1基因表达框,设计siRNA干扰序列,重组至带U6启动子真核表达载体,构建针对HCMV-IE1基因的siRNA真核表达载体(pHCMV-IE1i);经测序鉴定后,脂质体法转染HEL细胞HCMVAD169株,应用荧光显微技术、流式细胞术和RT-PCR法检测分析pHCMV-IE1i对HCMV-IE1基因的表达干扰效果.结果 测序结果显示针对HCMV-IE1基因的pHCMV-IE1i构建成功;荧光显微结果表明pHCMV-IE1i转入HEL细胞后可以特异抑制细胞中HCMV-IE1基因的表达;流式细胞术结果显示对照细胞组HCMV-IE1基因表达阳性率达60%以上,干扰细胞组HCMV-IE1基因表达阳性率仅达10%左右(P＜0.05);RT-PCR检测结果发现pHCMV-IE1i能显著抑制HCMV-IE1基因的表达(P＜0.05).结论 采用RNAi技术能有效抑制HCMV-IE1基因在细胞内的表达,对探讨其在防治HCMV感染疾病中的作用与意义提供了科学的实验依据.
目的 採用RNA榦擾技術研究在體外對人巨細胞病毒即刻早期Ⅰ基因(HCMV-IE1)錶達的沉默作用.方法 根據HCMV-IE1基因錶達框,設計siRNA榦擾序列,重組至帶U6啟動子真覈錶達載體,構建針對HCMV-IE1基因的siRNA真覈錶達載體(pHCMV-IE1i);經測序鑒定後,脂質體法轉染HEL細胞HCMVAD169株,應用熒光顯微技術、流式細胞術和RT-PCR法檢測分析pHCMV-IE1i對HCMV-IE1基因的錶達榦擾效果.結果 測序結果顯示針對HCMV-IE1基因的pHCMV-IE1i構建成功;熒光顯微結果錶明pHCMV-IE1i轉入HEL細胞後可以特異抑製細胞中HCMV-IE1基因的錶達;流式細胞術結果顯示對照細胞組HCMV-IE1基因錶達暘性率達60%以上,榦擾細胞組HCMV-IE1基因錶達暘性率僅達10%左右(P＜0.05);RT-PCR檢測結果髮現pHCMV-IE1i能顯著抑製HCMV-IE1基因的錶達(P＜0.05).結論 採用RNAi技術能有效抑製HCMV-IE1基因在細胞內的錶達,對探討其在防治HCMV感染疾病中的作用與意義提供瞭科學的實驗依據.
목적 채용RNA간우기술연구재체외대인거세포병독즉각조기Ⅰ기인(HCMV-IE1)표체적침묵작용.방법 근거HCMV-IE1기인표체광,설계siRNA간우서렬,중조지대U6계동자진핵표체재체,구건침대HCMV-IE1기인적siRNA진핵표체재체(pHCMV-IE1i);경측서감정후,지질체법전염HEL세포HCMVAD169주,응용형광현미기술、류식세포술화RT-PCR법검측분석pHCMV-IE1i대HCMV-IE1기인적표체간우효과.결과 측서결과현시침대HCMV-IE1기인적pHCMV-IE1i구건성공;형광현미결과표명pHCMV-IE1i전입HEL세포후가이특이억제세포중HCMV-IE1기인적표체;류식세포술결과현시대조세포조HCMV-IE1기인표체양성솔체60%이상,간우세포조HCMV-IE1기인표체양성솔부체10%좌우(P＜0.05);RT-PCR검측결과발현pHCMV-IE1i능현저억제HCMV-IE1기인적표체(P＜0.05).결론 채용RNAi기술능유효억제HCMV-IE1기인재세포내적표체,대탐토기재방치HCMV감염질병중적작용여의의제공료과학적실험의거.
