CAJ | 학술논문

为获得可溶性的番茄Metacaspase蛋白,后续研究Metacaspase蛋白的酶学特性以及功能,利用RT-PCR方法克隆了番茄(Lycopersicon esculentum)中Metacaspase(LeM)全长cDNA,并成功地构建了LeM基因的原核表达载体重组质粒pET28a-LeM,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)PlysS和Rosetta中进行诱导表达,并对诱导表达条件进行了优化.SDS-PAGE结果显示,在37℃条件下,1 mmol/L IPTG诱导表达量最高,在BL21(DE3)PlysS菌株中重组蛋白主要以包涵体形式存在,而相同条件下在Rosetta菌株中多为可溶性表达.同时酶活测定显示,Rosetta上清中LeM的活性为33 RFU/min,显著高于BL21(DE3)PlysS 7RFU/min.本实验表明,不同菌株对Metacaspase的可溶性表达有很大影响.
위획득가용성적번가Metacaspase단백,후속연구Metacaspase단백적매학특성이급공능,이용RT-PCR방법극륭료번가(Lycopersicon esculentum)중Metacaspase(LeM)전장cDNA,병성공지구건료LeM기인적원핵표체재체중조질립pET28a-LeM,전입대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3)PlysS화Rosetta중진행유도표체,병대유도표체조건진행료우화.SDS-PAGE결과현시,재37℃조건하,1 mmol/L IPTG유도표체량최고,재BL21(DE3)PlysS균주중중조단백주요이포함체형식존재,이상동조건하재Rosetta균주중다위가용성표체.동시매활측정현시,Rosetta상청중LeM적활성위33 RFU/min,현저고우BL21(DE3)PlysS 7RFU/min.본실험표명,불동균주대Metacaspase적가용성표체유흔대영향.