实验生物学报
實驗生物學報
실험생물학보
ACTA BIOLOGIAE EXPERIMENTLIS SINICA
2003年
4期
307-313
,共7页
罗金平%颜桂军%顾正%左嘉客
囉金平%顏桂軍%顧正%左嘉客
라금평%안계군%고정%좌가객
卵母细胞%绿色荧光蛋白%兔输卵管蛋白定位
卵母細胞%綠色熒光蛋白%兔輸卵管蛋白定位
란모세포%록색형광단백%토수란관단백정위
将兔输卵管蛋白(DPF-1)基因连结于增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因5′端,构建了真核表达重组质粒(pEGFP-N1/DPF-1),转染HeLa细胞,获得稳定表达分泌融合蛋白eGFP-DPF-1的HeLa细胞株.该融合蛋白呈现的分子量达120 KD,提示经翻译后修饰.取兔卵母细胞-卵丘细胞复合物(COC)、去除卵丘细胞后的卵母细胞或输卵管内的卵母细胞,与该株细胞共培养或培养于该株细胞条件培液中,观察兔输卵管蛋白在兔卵母细胞上的分布.结果显示DPF-1大量结合于卵母细胞透明带,先结合于透明带内层,然后维持在内层多外层少的分布状态上;在卵母细胞质膜表面则呈点状均匀分布.DPF-1在卵母细胞上的分布不受其周围颗粒细胞的阻碍,且颗粒细胞上未见有DPF-1结合的痕迹.本实验首次证实体外真核细胞表达分泌的输卵管蛋白能与卵母细胞结合,并借助绿色荧光蛋白作为示踪信号体外直接观察到该表达产物在卵母细胞上的动态分布,为进一步深入分析输卵管蛋白的功能提供了线索,也为研究输卵管内其他蛋白在配子/早胚上定位提供了可行的办法.
將兔輸卵管蛋白(DPF-1)基因連結于增彊型綠色熒光蛋白(eGFP)基因5′耑,構建瞭真覈錶達重組質粒(pEGFP-N1/DPF-1),轉染HeLa細胞,穫得穩定錶達分泌融閤蛋白eGFP-DPF-1的HeLa細胞株.該融閤蛋白呈現的分子量達120 KD,提示經翻譯後脩飾.取兔卵母細胞-卵丘細胞複閤物(COC)、去除卵丘細胞後的卵母細胞或輸卵管內的卵母細胞,與該株細胞共培養或培養于該株細胞條件培液中,觀察兔輸卵管蛋白在兔卵母細胞上的分佈.結果顯示DPF-1大量結閤于卵母細胞透明帶,先結閤于透明帶內層,然後維持在內層多外層少的分佈狀態上;在卵母細胞質膜錶麵則呈點狀均勻分佈.DPF-1在卵母細胞上的分佈不受其週圍顆粒細胞的阻礙,且顆粒細胞上未見有DPF-1結閤的痕跡.本實驗首次證實體外真覈細胞錶達分泌的輸卵管蛋白能與卵母細胞結閤,併藉助綠色熒光蛋白作為示蹤信號體外直接觀察到該錶達產物在卵母細胞上的動態分佈,為進一步深入分析輸卵管蛋白的功能提供瞭線索,也為研究輸卵管內其他蛋白在配子/早胚上定位提供瞭可行的辦法.
장토수란관단백(DPF-1)기인련결우증강형록색형광단백(eGFP)기인5′단,구건료진핵표체중조질립(pEGFP-N1/DPF-1),전염HeLa세포,획득은정표체분비융합단백eGFP-DPF-1적HeLa세포주.해융합단백정현적분자량체120 KD,제시경번역후수식.취토란모세포-란구세포복합물(COC)、거제란구세포후적란모세포혹수란관내적란모세포,여해주세포공배양혹배양우해주세포조건배액중,관찰토수란관단백재토란모세포상적분포.결과현시DPF-1대량결합우란모세포투명대,선결합우투명대내층,연후유지재내층다외층소적분포상태상;재란모세포질막표면칙정점상균균분포.DPF-1재란모세포상적분포불수기주위과립세포적조애,차과립세포상미견유DPF-1결합적흔적.본실험수차증실체외진핵세포표체분비적수란관단백능여란모세포결합,병차조록색형광단백작위시종신호체외직접관찰도해표체산물재란모세포상적동태분포,위진일보심입분석수란관단백적공능제공료선색,야위연구수란관내기타단백재배자/조배상정위제공료가행적판법.
