中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2004年
2期
224-228
,共5页
吴江雪%符武钊%张添元%罗进贤%吴群悦
吳江雪%符武釗%張添元%囉進賢%吳群悅
오강설%부무쇠%장첨원%라진현%오군열
人内皮细胞抑制素%毕赤酵母%高密度发酵%纯化%生物活性
人內皮細胞抑製素%畢赤酵母%高密度髮酵%純化%生物活性
인내피세포억제소%필적효모%고밀도발효%순화%생물활성
用30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素(EDN)酵母工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-EDN)的高密度发酵工艺,摸索出发酵培养基,pH,诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响.根据所确定的最适条件进行发酵,通过补料和甲醇诱导48 h后,工程菌GS115(pPIC9K-EDN)生物量的A600值达到250,分泌量为150 mg/L.发酵液经Streamline SP,Sepharose SP F F离子交换柱和Sepharose-HeparinHi Trap亲和柱纯化,产物纯度达97%以上,回收率为60%.Western印迹结果表明,酵母工程菌GS115(pPIC9K-EDN)表达的重组人内皮细胞抑制素具有天然EDN的免疫原性.MTT法和抑癌实验结果显示:纯化产物能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖并能抑制移植于小鼠的黑色素瘤的生长,其平均抑瘤率是94.2%.
用30升髮酵罐研究瞭內皮細胞抑製素(EDN)酵母工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-EDN)的高密度髮酵工藝,摸索齣髮酵培養基,pH,誘導時間等對菌體生長和基因錶達的影響.根據所確定的最適條件進行髮酵,通過補料和甲醇誘導48 h後,工程菌GS115(pPIC9K-EDN)生物量的A600值達到250,分泌量為150 mg/L.髮酵液經Streamline SP,Sepharose SP F F離子交換柱和Sepharose-HeparinHi Trap親和柱純化,產物純度達97%以上,迴收率為60%.Western印跡結果錶明,酵母工程菌GS115(pPIC9K-EDN)錶達的重組人內皮細胞抑製素具有天然EDN的免疫原性.MTT法和抑癌實驗結果顯示:純化產物能抑製人臍靜脈內皮細胞的增殖併能抑製移植于小鼠的黑色素瘤的生長,其平均抑瘤率是94.2%.
용30승발효관연구료내피세포억제소(EDN)효모공정균P.pastoris GS115(pPIC9K-EDN)적고밀도발효공예,모색출발효배양기,pH,유도시간등대균체생장화기인표체적영향.근거소학정적최괄조건진행발효,통과보료화갑순유도48 h후,공정균GS115(pPIC9K-EDN)생물량적A600치체도250,분비량위150 mg/L.발효액경Streamline SP,Sepharose SP F F리자교환주화Sepharose-HeparinHi Trap친화주순화,산물순도체97%이상,회수솔위60%.Western인적결과표명,효모공정균GS115(pPIC9K-EDN)표체적중조인내피세포억제소구유천연EDN적면역원성.MTT법화억암실험결과현시:순화산물능억제인제정맥내피세포적증식병능억제이식우소서적흑색소류적생장,기평균억류솔시94.2%.
