CAJ | 학술논문

背景与目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白是一个广义反式作用因子,同原发性肝癌的发生发展密切相关,由于其功能同蛋白-蛋白间相互作用有关,故本研究利用酵母双杂合体系筛选并鉴定HBV X蛋白结合蛋白.方法:聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法扩增HBV X基因序列,酵母双杂合体系3构建饵质粒pAS2-1-X,进行序列测定后转化入酵母菌AH109,以Westernblot法验证X-BD融合蛋白在酵母细胞中的正确表达.pAS2-1-X及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞,通过选择性培养、β-半乳糖苷酶活性测定筛选阳性菌落,分离实验及交合实验排除假阳性,扩增阳性克隆的目的基因并进行序列测定,检索其同源序列.结果:成功构建了pAS2-1-X饵质粒,Western blot证实转化的酵母细胞能正确表达X-BD融合蛋白,pAS2-1-X及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,选择性培养共长出97个菌落,β-半乳糖苷酶活性测定、分离实验及交合实验后筛选出1个阳性克隆,其cDNA插入片段与Fis基因高度同源.结论:通过酵母双杂合体系筛选出一个在酵母细胞内能与X蛋白结合的Fis蛋白.
배경여목적:을형간염병독(hepatitis B virus,HBV)X단백시일개엄의반식작용인자,동원발성간암적발생발전밀절상관,유우기공능동단백-단백간상호작용유관,고본연구이용효모쌍잡합체계사선병감정HBV X단백결합단백.방법:취합매련반응(polymerase chain reaction,PCR)법확증HBV X기인서렬,효모쌍잡합체계3구건이질립pAS2-1-X,진행서렬측정후전화입효모균AH109,이Westernblot법험증X-BD융합단백재효모세포중적정학표체.pAS2-1-X급정상성인간세포cDNA문고공전화효모세포,통과선택성배양、β-반유당감매활성측정사선양성균락,분리실험급교합실험배제가양성,확증양성극륭적목적기인병진행서렬측정,검색기동원서렬.결과:성공구건료pAS2-1-X이질립,Western blot증실전화적효모세포능정학표체X-BD융합단백,pAS2-1-X급정상성인간세포cDNA문고공전화효모세포후,선택성배양공장출97개균락,β-반유당감매활성측정、분리실험급교합실험후사선출1개양성극륭,기cDNA삽입편단여Fis기인고도동원.결론:통과효모쌍잡합체계사선출일개재효모세포내능여X단백결합적Fis단백.