上海预防医学
上海預防醫學
상해예방의학
SHANGHAI JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE
2006年
9期
432-434
,共3页
周欣%李燕婷%沈荣明%沈微娟%瞿涤
週訢%李燕婷%瀋榮明%瀋微娟%瞿滌
주흔%리연정%침영명%침미연%구조
S片段%实时荧光定量PCR%标准品
S片段%實時熒光定量PCR%標準品
S편단%실시형광정량PCR%표준품
[目的] 构建汉坦病毒S片段标准品,用于实时荧光定量PCR检测汉坦病毒. [方法] 对S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,提取病人总RNA,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒,提取质粒并进行定量. [结果] 重组S片段基因质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明基因已成功克隆.以不同稀释水平的标准品进行扩增,统计学分析显示Ct 值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数在0.99以上.成功制备并获得稳定的S片段重组质粒. [结论] 该方法能大量制备质粒标准品,如何进行荧光RT-PCR条件的优化是关键所在.
[目的] 構建漢坦病毒S片段標準品,用于實時熒光定量PCR檢測漢坦病毒. [方法] 對S片段基因進行序列分析,利用引物設計軟件設計齣一對引物和一條熒光探針,提取病人總RNA,逆轉錄為cDNA,經PCR擴增,產物純化後與PMD 18-T Vector連接,轉化到大腸桿菌DH5α,篩選得到標準品的質粒,提取質粒併進行定量. [結果] 重組S片段基因質粒進行熒光定量PCR擴增齣現彊烈的熒光值增長,錶明基因已成功剋隆.以不同稀釋水平的標準品進行擴增,統計學分析顯示Ct 值與標準品濃度的對數存在良好線性關繫,迴歸繫數在0.99以上.成功製備併穫得穩定的S片段重組質粒. [結論] 該方法能大量製備質粒標準品,如何進行熒光RT-PCR條件的優化是關鍵所在.
[목적] 구건한탄병독S편단표준품,용우실시형광정량PCR검측한탄병독. [방법] 대S편단기인진행서렬분석,이용인물설계연건설계출일대인물화일조형광탐침,제취병인총RNA,역전록위cDNA,경PCR확증,산물순화후여PMD 18-T Vector련접,전화도대장간균DH5α,사선득도표준품적질립,제취질립병진행정량. [결과] 중조S편단기인질립진행형광정량PCR확증출현강렬적형광치증장,표명기인이성공극륭.이불동희석수평적표준품진행확증,통계학분석현시Ct 치여표준품농도적대수존재량호선성관계,회귀계수재0.99이상.성공제비병획득은정적S편단중조질립. [결론] 해방법능대량제비질립표준품,여하진행형광RT-PCR조건적우화시관건소재.
