中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
3期
207-211
,共5页
乙型肝炎表面抗原%多拷贝数%毕赤酵母
乙型肝炎錶麵抗原%多拷貝數%畢赤酵母
을형간염표면항원%다고패수%필적효모
目的 通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株.方法 通过对单拷贝表达质粒进行改造,将表达盒(5'AOX-HBsAg-TT)重复导人载体,构建多拷贝数表达质粒.通过电转化、15 L规模发酵和纯化,获得纯化HBsAS颗粒,并对表达产物的特异性、免疫原性及表达量与拷贝数间的关系进行分析.结果 多拷贝数重组毕赤酵母的表达产物经ELISA、SDS-PAGE、Western blot检测,显示出良好的特异性,电镜观察证明表达产物能够自发装配成22 nm 类病毒颗粒(VLP),其表达量与拷贝数呈正相关,拷贝数提高未对菌体正常生长带来影响,HBsAg制备的免疫原能有效刺激小鼠产生保护性抗体.结论 含多拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高毕赤酵母HBsAg表达量.
目的 通過構建多拷貝數錶達質粒,穫得高錶達乙型肝炎錶麵抗原(HBsAg)的畢赤酵母(Pichia pastoris)菌株.方法 通過對單拷貝錶達質粒進行改造,將錶達盒(5'AOX-HBsAg-TT)重複導人載體,構建多拷貝數錶達質粒.通過電轉化、15 L規模髮酵和純化,穫得純化HBsAS顆粒,併對錶達產物的特異性、免疫原性及錶達量與拷貝數間的關繫進行分析.結果 多拷貝數重組畢赤酵母的錶達產物經ELISA、SDS-PAGE、Western blot檢測,顯示齣良好的特異性,電鏡觀察證明錶達產物能夠自髮裝配成22 nm 類病毒顆粒(VLP),其錶達量與拷貝數呈正相關,拷貝數提高未對菌體正常生長帶來影響,HBsAg製備的免疫原能有效刺激小鼠產生保護性抗體.結論 含多拷貝數錶達質粒的工程菌可顯著提高畢赤酵母HBsAg錶達量.
목적 통과구건다고패수표체질립,획득고표체을형간염표면항원(HBsAg)적필적효모(Pichia pastoris)균주.방법 통과대단고패표체질립진행개조,장표체합(5'AOX-HBsAg-TT)중복도인재체,구건다고패수표체질립.통과전전화、15 L규모발효화순화,획득순화HBsAS과립,병대표체산물적특이성、면역원성급표체량여고패수간적관계진행분석.결과 다고패수중조필적효모적표체산물경ELISA、SDS-PAGE、Western blot검측,현시출량호적특이성,전경관찰증명표체산물능구자발장배성22 nm 류병독과립(VLP),기표체량여고패수정정상관,고패수제고미대균체정상생장대래영향,HBsAg제비적면역원능유효자격소서산생보호성항체.결론 함다고패수표체질립적공정균가현저제고필적효모HBsAg표체량.
