山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2008年
4期
349-352
,共4页
魏军民%侯明%李丽珍%孔峰%卞继峰
魏軍民%侯明%李麗珍%孔峰%卞繼峰
위군민%후명%리려진%공봉%변계봉
RNA干扰%基因,MDR-1%抗药性,肿瘤%细胞株,MCF-7/ADR
RNA榦擾%基因,MDR-1%抗藥性,腫瘤%細胞株,MCF-7/ADR
RNA간우%기인,MDR-1%항약성,종류%세포주,MCF-7/ADR
目的 构建靶向多药耐药基因(MDR-1)的短发夹RNA(short hairpin loop RNA shRNA)干扰表达质粒,并探讨其逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的作用效果.方法 根据MDR-1基因表达序列设计有效的RNA干扰片断,构建并获得MDR-1基因特异的shRNA质粒表达载体pRNAT-U6.1/Neo-mdr1,采用lipofectin2000分别转染人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR,利用G418筛选稳定表达的细胞克隆.利用RT-PCR检测MDR-1-RNA的表达,Western Blotting检测MDR-1蛋白质的表达,MTT法检测耐药逆转效果,罗丹明123外排实验检测p-gp的转运功能.结果 成功构建表达siRNA的质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-mdr1,转染人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR后48 h及G418筛选后1、2月,mdr1-RNA及蛋白质表达均呈明显下降,p-gp的转运功能明显提高,对阿霉素的敏感性增强,与耐药细胞及转入空白载体的细胞比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).筛选后1、2月与转入48 h比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 shRNA干扰表达质粒pRNAT-U6.1/Neo-mdr1能够稳定、持久的抑制MDR-1基因,逆转乳腺癌细胞MCF-7/ADR对阿霉素的耐药性.
目的 構建靶嚮多藥耐藥基因(MDR-1)的短髮夾RNA(short hairpin loop RNA shRNA)榦擾錶達質粒,併探討其逆轉人乳腺癌細胞MCF-7/ADR多藥耐藥的作用效果.方法 根據MDR-1基因錶達序列設計有效的RNA榦擾片斷,構建併穫得MDR-1基因特異的shRNA質粒錶達載體pRNAT-U6.1/Neo-mdr1,採用lipofectin2000分彆轉染人乳腺癌耐藥細胞MCF-7/ADR,利用G418篩選穩定錶達的細胞剋隆.利用RT-PCR檢測MDR-1-RNA的錶達,Western Blotting檢測MDR-1蛋白質的錶達,MTT法檢測耐藥逆轉效果,囉丹明123外排實驗檢測p-gp的轉運功能.結果 成功構建錶達siRNA的質粒載體pRNAT-U6.1/Neo-mdr1,轉染人乳腺癌耐藥細胞MCF-7/ADR後48 h及G418篩選後1、2月,mdr1-RNA及蛋白質錶達均呈明顯下降,p-gp的轉運功能明顯提高,對阿黴素的敏感性增彊,與耐藥細胞及轉入空白載體的細胞比較,差異有統計學意義(P均＜0.05).篩選後1、2月與轉入48 h比較,差異無統計學意義(P＞0.05).結論 shRNA榦擾錶達質粒pRNAT-U6.1/Neo-mdr1能夠穩定、持久的抑製MDR-1基因,逆轉乳腺癌細胞MCF-7/ADR對阿黴素的耐藥性.
목적 구건파향다약내약기인(MDR-1)적단발협RNA(short hairpin loop RNA shRNA)간우표체질립,병탐토기역전인유선암세포MCF-7/ADR다약내약적작용효과.방법 근거MDR-1기인표체서렬설계유효적RNA간우편단,구건병획득MDR-1기인특이적shRNA질립표체재체pRNAT-U6.1/Neo-mdr1,채용lipofectin2000분별전염인유선암내약세포MCF-7/ADR,이용G418사선은정표체적세포극륭.이용RT-PCR검측MDR-1-RNA적표체,Western Blotting검측MDR-1단백질적표체,MTT법검측내약역전효과,라단명123외배실험검측p-gp적전운공능.결과 성공구건표체siRNA적질립재체pRNAT-U6.1/Neo-mdr1,전염인유선암내약세포MCF-7/ADR후48 h급G418사선후1、2월,mdr1-RNA급단백질표체균정명현하강,p-gp적전운공능명현제고,대아매소적민감성증강,여내약세포급전입공백재체적세포비교,차이유통계학의의(P균＜0.05).사선후1、2월여전입48 h비교,차이무통계학의의(P＞0.05).결론 shRNA간우표체질립pRNAT-U6.1/Neo-mdr1능구은정、지구적억제MDR-1기인,역전유선암세포MCF-7/ADR대아매소적내약성.
