CAJ | 학술논문

根据已报道无脊椎动物嗅觉相关蛋白Gqoα的氨基酸序列保守区设计简并引物,以麦长管蚜(Sitobion avenae)有翅成蚜cDNA为模板,结合RT-PCR及RACE技术扩增编码麦长管蚜Gqα蛋白的cDNA序列,其cDNA序列开放阅读框长为1 062 bp,编码352个氨基酸,预测蛋白分子量为40.8 kD,与GenBank多个物种Gqα cDNA序列及氨基酸序列均有很高相似性(≥82.17%)(GenBank登录号为EF638906),并具有Gα亚基q类蛋白的典型特征.利用TOPO及Gateway技术,通过体外重组反应,构建苜蓿丫纹夜蛾核型多角体杆状病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)重组病毒.将N端融合了V5-His6标记的V5-His6Gqot序列整合到AcMNPV病毒基因组DNA中,得到具有独立转染活性的重组杆状病毒.转染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)离体细胞系Tn-581-4(Tn细胞),进行Gqα蛋白的真核表达.SDS-PAGE检测到预期分子量约42kD的蛋白带,Westem blot检测到表达产物.表明含有6个组氨酸标签及V5抗体结合位点的Gqα融合蛋白V5-His6Gqα在昆虫离体细胞系中成功地表达.
근거이보도무척추동물후각상관단백Gqoα적안기산서렬보수구설계간병인물,이맥장관아(Sitobion avenae)유시성아cDNA위모판,결합RT-PCR급RACE기술확증편마맥장관아Gqα단백적cDNA서렬,기cDNA서렬개방열독광장위1 062 bp,편마352개안기산,예측단백분자량위40.8 kD,여GenBank다개물충Gqα cDNA서렬급안기산서렬균유흔고상사성(≥82.17%)(GenBank등록호위EF638906),병구유Gα아기q류단백적전형특정.이용TOPO급Gateway기술,통과체외중조반응,구건목숙아문야아핵형다각체간상병독(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)중조병독.장N단융합료V5-His6표기적V5-His6Gqot서렬정합도AcMNPV병독기인조DNA중,득도구유독립전염활성적중조간상병독.전염분문야아(Trichoplusia ni)리체세포계Tn-581-4(Tn세포),진행Gqα단백적진핵표체.SDS-PAGE검측도예기분자량약42kD적단백대,Westem blot검측도표체산물.표명함유6개조안산표첨급V5항체결합위점적Gqα융합단백V5-His6Gqα재곤충리체세포계중성공지표체.