CAJ | 학술논문

目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体，观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列，定向插入真核表达质粒pEGFP-N1中，构建重组质粒pEGFP-N1·KNOB△HI，同时在缺失HI环部位引入EcoRV限制性酶切位点。在此基础上，用降落PCR克隆纤毛基因全长编码区序列，构建出腺病毒穿梭质粒pNEB-F5。利用凝胶图像分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy-1，pShuttle-GFP在E. coli BJ5183中同源重组，得腺病毒载体Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP。用Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP分别感染CD133+人大肠癌细胞株SW480，通过荧光显微镜观察感染效率。结果降落PCR和重叠延伸PCR都扩增出特异性条带，测序结果与预期相符。与Ad5-GFP相比,Ad5FHI-GFP对CD133+人大肠癌细胞株SW480有显著提高。结论利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体，利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体，其对CD133+人大肠癌细胞株Sw480实验显示Ad5FHI-GFP组感染效率明显强于Ad5-GFP组。
목적 응용강락화중첩연신PCR법구건대종류간세포유특이파향성적고효재체-복제결함형선병독재체，관찰기대CD133+인대장암세포주SW480적감염효솔。방법이용중첩연신PCR기술확증5형선병독섬모구단HI배량단적기인서렬，정향삽입진핵표체질립pEGFP-N1중，구건중조질립pEGFP-N1·KNOB△HI，동시재결실HI배부위인입EcoRV한제성매절위점。재차기출상，용강락PCR극륭섬모기인전장편마구서렬，구건출선병독천사질립pNEB-F5。이용응효도상분석화기인측서험증소구건질립적정학성。재여pAdEasy-1，pShuttle-GFP재E. coli BJ5183중동원중조，득선병독재체Ad5FHI-GFP화Ad5-GFP。용Ad5FHI-GFP화Ad5-GFP분별감염CD133+인대장암세포주SW480，통과형광현미경관찰감염효솔。결과 강락PCR화중첩연신PCR도확증출특이성조대，측서결과여예기상부。여Ad5-GFP상비,Ad5FHI-GFP대CD133+인대장암세포주SW480유현저제고。결론 이용강락화중첩연신PCR성공구건신형파향종류간세포적선병독재체，이용강락화중첩연신PCR성공구건신형파향종류간세포적선병독재체，기대CD133+인대장암세포주Sw480실험현시Ad5FHI-GFP조감염효솔명현강우Ad5-GFP조。