生物安全学报
生物安全學報
생물안전학보
Journal of Biosafety
2012年
1期
74-78
,共5页
张桂芬%刘万学%郭建英%吕志创%万方浩%申香菊
張桂芬%劉萬學%郭建英%呂誌創%萬方浩%申香菊
장계분%류만학%곽건영%려지창%만방호%신향국
美洲斑潜蝇%线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因%快速鉴定%种特异性引物%分子检测
美洲斑潛蠅%線粒體DNA細胞色素氧化酶亞基Ⅰ基因%快速鑒定%種特異性引物%分子檢測
미주반잠승%선립체DNA세포색소양화매아기Ⅰ기인%쾌속감정%충특이성인물%분자검측
[背景]美洲斑潜蝇是一种严重威胁瓜果蔬菜、烟草、棉花等经济作物和花卉生产的入侵性害虫.由于潜叶蝇类害虫体型较小、生活方式隐蔽、形态相似,本文针对其难以快速准确地进行形态鉴别的问题,以美洲斑潜蝇为研究对象,以菜田常见的4种潜叶蝇类害虫为参照,采用种特异性PCR方法(species-specific PCR,SS-PCR),研究其快速分子检测鉴定技术.[方法]调用GenBank中一段936 bp的美洲斑潜蝇线粒体DNA (mtDNA)细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因(COI)的序列(Gen-Bank登录号为EU219613),并根据此基因片段的碱基序列设计引物1对,其扩增片段大小为294 bp.[结果]种特异性检验结果显示,该引物只对美洲斑潜蝇的COI基因具有扩增能力,对其他种类如南美斑潜蝇、三叶斑潜蝇、葱斑潜蝇、豌豆潜叶蝇等没有扩增能力.该引物不仅对成虫具有良好的扩增效果,对蛹、幼虫以及单粒卵也具有同样的扩增效果,其最低检出阈值为1/3840头成虫.[结论与意义]SS-PCR技术体系可用于美洲斑潜蝇的鉴定识别与检测监测,对阻止其进一步扩散蔓延具有重要意义.
[揹景]美洲斑潛蠅是一種嚴重威脅瓜果蔬菜、煙草、棉花等經濟作物和花卉生產的入侵性害蟲.由于潛葉蠅類害蟲體型較小、生活方式隱蔽、形態相似,本文針對其難以快速準確地進行形態鑒彆的問題,以美洲斑潛蠅為研究對象,以菜田常見的4種潛葉蠅類害蟲為參照,採用種特異性PCR方法(species-specific PCR,SS-PCR),研究其快速分子檢測鑒定技術.[方法]調用GenBank中一段936 bp的美洲斑潛蠅線粒體DNA (mtDNA)細胞色素氧化酶亞基Ⅰ基因(COI)的序列(Gen-Bank登錄號為EU219613),併根據此基因片段的堿基序列設計引物1對,其擴增片段大小為294 bp.[結果]種特異性檢驗結果顯示,該引物隻對美洲斑潛蠅的COI基因具有擴增能力,對其他種類如南美斑潛蠅、三葉斑潛蠅、蔥斑潛蠅、豌豆潛葉蠅等沒有擴增能力.該引物不僅對成蟲具有良好的擴增效果,對蛹、幼蟲以及單粒卵也具有同樣的擴增效果,其最低檢齣閾值為1/3840頭成蟲.[結論與意義]SS-PCR技術體繫可用于美洲斑潛蠅的鑒定識彆與檢測鑑測,對阻止其進一步擴散蔓延具有重要意義.
[배경]미주반잠승시일충엄중위협과과소채、연초、면화등경제작물화화훼생산적입침성해충.유우잠협승류해충체형교소、생활방식은폐、형태상사,본문침대기난이쾌속준학지진행형태감별적문제,이미주반잠승위연구대상,이채전상견적4충잠협승류해충위삼조,채용충특이성PCR방법(species-specific PCR,SS-PCR),연구기쾌속분자검측감정기술.[방법]조용GenBank중일단936 bp적미주반잠승선립체DNA (mtDNA)세포색소양화매아기Ⅰ기인(COI)적서렬(Gen-Bank등록호위EU219613),병근거차기인편단적감기서렬설계인물1대,기확증편단대소위294 bp.[결과]충특이성검험결과현시,해인물지대미주반잠승적COI기인구유확증능력,대기타충류여남미반잠승、삼협반잠승、총반잠승、완두잠협승등몰유확증능력.해인물불부대성충구유량호적확증효과,대용、유충이급단립란야구유동양적확증효과,기최저검출역치위1/3840두성충.[결론여의의]SS-PCR기술체계가용우미주반잠승적감정식별여검측감측,대조지기진일보확산만연구유중요의의.